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熱景外泌體提取

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023年11月10日

Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強(qiáng)的抗種瘤功效,且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,由此可以證明,外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性。到目前為止,外泌體在肺病醫(yī)治方面的研究主要集中于免疫壓制,有效的外泌體藥物遞送平臺(tái)的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在醫(yī)治靶點(diǎn)的探索。已有的研究表明外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病醫(yī)治領(lǐng)域早日得到突破,造福更多的患者。日本和光著眼于巨噬細(xì)胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細(xì)胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。熱景外泌體提取

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為了解決外泌體實(shí)驗(yàn)遇到的上述的各種問題,Wako研發(fā)出MagCapture?外泌體提取試劑盒PS(MagCapture?ExosomeIsolationKitPS)提取高純度細(xì)胞外囊泡。外泌體膜含有分泌細(xì)胞源的蛋白和脂質(zhì),眾所周知磷脂酰絲氨酸(PS)在活細(xì)胞通過翻轉(zhuǎn)酶作用導(dǎo)向細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),暴露在外泌體膜外側(cè)3)。另外,T-cellimmunoglobulindomainandmucindomain-containingprotein4(Tim4通過巨噬細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞凋亡的吞噬受體)蛋白通過細(xì)胞外域IgV域與含有鈣離子的PS結(jié)合4)。基于上述知識(shí),我們利用Tim4固化磁珠,在鈣離子存在下捕捉培養(yǎng)上清和血清等樣品中的外泌體,再添加螯合劑洗脫外泌體,這種外泌體純化方法是和金澤大學(xué)醫(yī)學(xué)系免疫學(xué)華山教授共同開發(fā),并取得了成功。5)這是迄今為止取代黃金標(biāo)準(zhǔn)超速離心法的新型外泌體純化方法。熱景外泌體提取隨著今后的研究發(fā)展,外泌體功能逐步清晰,并擴(kuò)大臨床應(yīng)用。

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唾液中包含來自于唾液腺上皮體外細(xì)胞的外泌體,Michael等從唾液中提取外泌體,并對(duì)唾液外泌體中的miRNA進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)此類miRNA有望作為成為唾液腺疾病的生物標(biāo)志物。Wu等成功從汗液中提取得到外泌體,并進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,在汗液外泌體中鑒定到1062種蛋白質(zhì),其中包含多種抗jun肽和免疫因子,表明汗液外泌體參與皮膚免疫。Liu等從患有阿爾茲海默癥患小鼠的腦脊髓液中提取得到外泌體,并與野生型小鼠進(jìn)行對(duì)比,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組miR-193b明顯下調(diào)。

通過對(duì)28例前列腺ai癥患者和19例正常人尿液外泌體中的miRNA進(jìn)行深度測(cè)序分析,發(fā)現(xiàn)兩種miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者組明顯下調(diào),表明尿液外泌體中的特異性miRNA可能作為前列腺ai的新型生物標(biāo)志物。Khurana等[100]將研究對(duì)象由miRNAs擴(kuò)大至多種類型RNA,通過對(duì)慢性腎病患者尿液外泌體中各類RNA進(jìn)行系統(tǒng)研究,在慢性腎病患者組中識(shí)別出30種明顯差異的lncRNAs,表明尿液外泌體中的lncRNAs具有作為慢性腎病早期診斷標(biāo)志物的潛力。Skotland等的研究則表明尿液外泌體中的脂質(zhì)能夠作為前列腺ai的新型標(biāo)志物,3種脂質(zhì)標(biāo)志物結(jié)合使用能夠有效提高對(duì)前列腺ai的診斷靈敏度(93%)和特異性(100%)。外泌體中含有豐富的蛋白質(zhì)和遺傳物質(zhì)DNA以及RNA等。

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由于卵巢中流細(xì)胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸(phosphati[1]dylserine,PS)可以外泌體形式分泌入血,惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對(duì)照者,因此外泌體中的PS可用于協(xié)助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點(diǎn)也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIIImRNA已被證明可作為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者診斷的支持證據(jù)。2020年,DavidLyden和WilliamR.Jarnagin教授團(tuán)隊(duì)合作,通過探究來自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個(gè)人類樣品中細(xì)胞外囊泡和顆粒(extracellularvesicleandparticle,EVP)的蛋白質(zhì)組學(xué)特征,鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白(特異度和靈敏度分別為95%和90%),并可區(qū)分患者的中流類型,使基于外泌體的中流診斷和鑒別診斷向前邁進(jìn)了一步。外泌體在體液中十分穩(wěn)定,同時(shí)外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會(huì)分解。熱景外泌體提取

必須慎重分析得到的是否是外泌體。熱景外泌體提取

外泌體能攜帶多種生物活性分子循環(huán)于血液/體液中并介導(dǎo)長(zhǎng)距離的細(xì)胞間通訊,中流來源外泌體富含的蛋白質(zhì)、核苷酸、脂質(zhì)等分子能夠反映其來源細(xì)胞的生理及病理狀態(tài),外泌體特殊的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)能保護(hù)其內(nèi)RNA等分子免于降解,因此,檢測(cè)中流外泌體成為液體活檢一個(gè)明顯優(yōu)勢(shì)。臨床試驗(yàn)研究表明,外泌體在多種疾病的早期診斷、療效和預(yù)后監(jiān)測(cè)等方面都具備較好的應(yīng)用價(jià)值,正逐漸成為臨床診療中新的、理想的生物標(biāo)志物和可能的靶向藥物載體。隨著技術(shù)的進(jìn)步,組學(xué)時(shí)代的到來,大規(guī)模蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)被聯(lián)合應(yīng)用于篩選和揭示多種ai癥細(xì)胞外囊泡的標(biāo)志物。熱景外泌體提取

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