密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會沉淀到底部。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。湖南外泌體circRNA測序

在當(dāng)代準確醫(yī)療的大趨勢下，外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù)。根據(jù)種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機制的研究，臨床醫(yī)療人員可以針對不同的患者制定合適的醫(yī)治方案，以達到改善肺病患者生存率，延長肺病患者生存時間的目的。但是，針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決，如：外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機制及信號通路等。總而言之，外泌體的研究有著廣闊的前景，基于外泌體與肺病的研究，有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施，造福更多的患者。湖南外泌體circRNA測序所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體。

在免疫系統(tǒng)中，淋巴細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、肥大細胞等均可以產(chǎn)生外泌體。研究表明免疫細胞來源的外泌體能夠明顯影響機體的免疫調(diào)節(jié)機制，包括調(diào)節(jié)抗原呈遞、免疫激huo、免疫監(jiān)督等。不同免疫細胞來源的外泌體功能不同，以樹突狀細胞(該細胞具有免疫刺激能力，是目前能夠激huo初始T細胞的抗原遞呈細胞)來源的外泌體為例，其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細胞的成熟狀態(tài)。成熟的樹突狀細胞外泌體內(nèi)包含能夠直接激huoT細胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ，共刺激分子如CD40、CD8、CD86和熱激蛋白，這些分子使樹突狀細胞來源的外泌體具有抗原呈遞、調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的生物功能。

多項研究表明中流細胞來源的外泌體能夠抑制免疫相關(guān)的信號通路、阻礙機體對中流的免疫響應(yīng)。Chen等研究發(fā)現(xiàn)黑色素瘤細胞、乳腺ai和肺ai細胞會產(chǎn)生攜帶程序性死亡分子1的配體(programmedcelldeath1ligand1，PD-L1)的外泌體，此類外泌體在血液中循環(huán)，通過表面PD-L1與T細胞結(jié)合，導(dǎo)致T細胞在到達中流細胞之前即受到抑制，達到遠程干擾免疫細胞活性的效果。中流來源的外泌體能夠抑制骨髓來源的抑制性細胞(該細胞是樹突狀細胞(dendriticcells，DCs)、巨噬細胞和(或)粒細胞的前體，具有抑制免疫細胞應(yīng)答的能力)對中流的免疫監(jiān)督。中流細胞來源的外泌體與巨噬細胞共孵育后，其內(nèi)的miRNA-301a通過下調(diào)抑ai基因PTEN)，激huoPI3Kγ(phosphoinositide3-kinaseγ)信號分子，使巨噬細胞被“馴化”成為能參與抗yan反應(yīng)、血管生成以及促進中流生長轉(zhuǎn)移的M2型巨噬細胞。在過去幾年中，有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌，并討論了其潛在的生物學(xué)功能。

外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn)，NY-ESO-1是單獨對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調(diào)，進一步研究發(fā)現(xiàn)，let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者，高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預(yù)后密切相關(guān)。干細胞外泌體可以有效活化提高細胞能量加速細胞排毒、淡化色斑。湖南外泌體circRNA測序

PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。湖南外泌體circRNA測序

外泌體是新型治理劑，瘤轉(zhuǎn)移是一個包括病細胞侵入、血管中存活和殖民化等多步驟的復(fù)雜過程。外泌體能夠影響這個級聯(lián)反應(yīng)的每一步，因此可作為瘤治理的靶點。瘤細胞在轉(zhuǎn)移到其他組織時需要在間質(zhì)細胞間移動并到達血管中，在這個過程中，瘤細胞外泌體通過纖維連接蛋白促進瘤細胞的運動性，再通過蛋白酶促進細胞外基質(zhì)的分解、血管生成，進而促進瘤轉(zhuǎn)移。多數(shù)瘤細胞對轉(zhuǎn)移的組織具有指向性，而外泌體表面的整合素就是決定其指向性的因子，如外泌體αvβ5整合素決定了對肝臟的指向性，而外泌體α6β4?α6β1整合素決定了對肺部的指向性。湖南外泌體circRNA測序