免疫組化（IHC）利用抗體檢測組織切片中蛋白質(zhì)和其他抗原的定位。

英瀚斯生物實(shí)驗(yàn)外包，自有專業(yè)病理實(shí)驗(yàn)室，可高效完成免疫組化檢測。

抗體-抗原的相互作用通過有色酶底物顯色檢測或熒光染料熒光檢測進(jìn)行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質(zhì)印跡或ELISA，但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達(dá)譜對病理學(xué)家以及作為診斷工具都具有重要意義。

IHC實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于穩(wěn)定、優(yōu)化且可重復(fù)的染色方案，而該方案應(yīng)使用高質(zhì)量的特異性試劑。 病理報(bào)告中的免疫組化到底有什么作用?內(nèi)蒙古切片免疫組化實(shí)驗(yàn)

免疫組化結(jié)果中的假陰性是指所有抗體標(biāo)記的切片均呈陰性，無陽性信號，假陰性結(jié)果不是真實(shí)的反應(yīng)。導(dǎo)致假陰性結(jié)果的原因有:(1)抗原修復(fù)方法選擇不當(dāng)，根據(jù)不同的抗原特點(diǎn)采用不同的修復(fù)方法，大多數(shù)抗體要求熱修復(fù)，熱修復(fù)又包括高壓修復(fù)、微波修復(fù)及煮沸熱修復(fù);而對某些細(xì)胞內(nèi)抗原和細(xì)胞間質(zhì)抗原需要用酶消化，如表皮生長因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin則不用修復(fù);(2)一抗本身的問題:一抗效價(jià)降低或失效。在免疫組化中染色結(jié)果的假陰性會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)診或漏診，進(jìn)而影響臨床診斷及延誤醫(yī)療。解決這一問題的可通過設(shè)立陽性對照，比較兩者染色結(jié)果。若陽性對照有表達(dá)，表明試劑和染色體系及實(shí)驗(yàn)步驟均無問題;若陽性對照無表達(dá)，則檢測過程中某一試劑或某個(gè)步驟存在問題，應(yīng)逐一查找原因。內(nèi)蒙古切片免疫組化實(shí)驗(yàn)英瀚斯生物，專業(yè)病理老師負(fù)責(zé)免疫組化外包！

免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來水充分沖洗。

13）可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?

免疫組化的特點(diǎn)：

1）特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2）敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

3）定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義的。

英瀚斯生物，自建病理平臺(tái)實(shí)驗(yàn)室，專業(yè)免疫組化。 免疫組化相關(guān)知識(shí)匯總。

免疫組化結(jié)果要如何分析？

 （1）陽性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在40*光鏡下，隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野，機(jī)器或人工計(jì)數(shù)陽性著色細(xì)胞，每組3~6張不同動(dòng)物組織切片，然后進(jìn)行組間比較即可。

（2）灰密度分析法。可以通過在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。

（3）評分法。用光學(xué)顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進(jìn)行評分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**終可以分?jǐn)?shù)相加，再進(jìn)行比較。對于以上這幾種方法，各有利弊，請細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

英瀚斯生物，專業(yè)病理染色團(tuán)隊(duì)，不止做檢測，還有專業(yè)病理分析。 哪里可以做免疫組化？內(nèi)蒙古切片免疫組化實(shí)驗(yàn)

英瀚斯生物免疫組化，高效高質(zhì)量出結(jié)果。內(nèi)蒙古切片免疫組化實(shí)驗(yàn)

免疫組化在什么情況下進(jìn)行組織抗原修復(fù)，抗原修復(fù)的條件是什么？ 

（1）由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中，發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用，從而失去抗原性。通過抗原修復(fù)，使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露，提高抗原檢測率。

（2）修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種，高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種（具體的可以查閱相關(guān)資料，大量的：中性的、高pH的等）。

（3）微波修復(fù)，我們一般用6min*4次，效果不錯(cuò)。

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