免疫組化鏡檢：在進行鏡檢前可以通過相關的資料進行查詢，進行指導檢查到抗體的表達部位有細胞間質、細胞膜、細胞漿、核膜、細胞核以及在其中的多個部位表達（如：MPO抗體表達在細胞膜、細胞漿、核膜、細胞核上）和表達組織（如：VWF抗體在血管壁上表達，呈現環形）。實際操作過程中，在顯微鏡下觀察時，先在4倍鏡下查找組織及其范圍，然后查看整個組織確定陽性產物的表達部位，然后將陽性產物表達部位置于視野正中，換高倍鏡觀察。優化的抗原修復步驟能明顯提升免疫組化染色的敏感性和特異性。杭州組織芯片免疫組化實驗流程

免疫組化即用型二步法的具體實驗流程步驟簡介：1、脫蠟、水化組織切片；2、根據所應用的一抗的特殊要求，對組織切片進行預處理；3、0.3%或3%H2O2去離子水孵育5分鐘-30分鐘，以阻斷內源性過氧化物酶，PBS或TBS沖洗；4、滴加一抗，室溫或37℃孵育30~60分鐘，或4℃過夜，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次；5、滴加enhangcer增強劑，37℃30min，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次；6、滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體，室溫/37℃孵育30分鐘-1h，PBS/TBS沖洗，3分鐘×5次；7、應用DAB溶液顯色；8、蒸餾水沖洗、復染、脫水、透明、封片。中山多重免疫組化分析免疫組化技術，以特異性抗體為探針，有效識別細胞內目標蛋白。

幾種常用免疫組織化學方法的原理：1、免疫熒光方法：利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后即會發出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。2、免疫酶標方法：基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前常用的技術。3、免疫膠體金技術：免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。

免疫組化實驗中，優化抗原修復選擇策略簡述：首先，依據抗原理化性質和位置（細胞質、膜、核）選擇修復方法。其次，初步試驗確定是否需修復。細胞質抗原傾向溫和修復；細胞膜抗原可能需較強修復；細胞核抗原則需準確修復。特殊抗原依據文獻指導。優化修復條件，調整pH、溫度、時間。設置對照，包括陰性、陽性及修復條件對照，確保結果準確性。進行預實驗，對比不同修復條件下染色效果。考慮組織和固定因素對修復方法的影響。綜上，合理選擇修復方法需準確考慮抗原特性、實驗條件，通過系統性測試優化。通過熒光或酶標記的二抗，免疫組化在顯微鏡下直觀展示細胞內蛋白分布。

免疫組化的結果判斷標準主要涵蓋：1、患者基本信息，如姓名、年齡、性別和檢查時間，這些信息是判斷結果準確性的基礎；2、病理圖像直觀展示病變性質，病理診斷結果明確病變類型和原發部位；3、免疫組化指標是關鍵，常用英文縮寫表示，如CEA、NSE、AFP等。陽性表示相應抗原表達，且“+”越多表達性越高。不同指標有不同意義；4、綜合分析是主要，醫生需結合患者情況、病理圖像、診斷結果和免疫組化指標，并參考其他檢查結果和臨床表現，進行綜合判斷。免疫組化對評估診斷效果有一定意義。宿遷多重免疫組化

免疫組化技術利用抗體特異性識別抗原，實現組織中特定蛋白的定位與定量分析。杭州組織芯片免疫組化實驗流程

免疫組化技術中的信號放大方法主要包括以下幾種：1、TSA技術（酪胺信號放大技術）： TSA技術基于酪胺的過氧化物酶反應，產生大量的酶促產物，這些產物能與周圍的蛋白殘基結合，使得蛋白樣品與熒光素穩定結合。該方法可以在一張組織切片上實現7-9種靶標的標記，有效提高了檢測的靈敏度和準確性。2、多聚酶法：通過多聚酶的作用，可以在抗體上形成大量的酶分子聚集體，從而增強信號的強度。這種方法在免疫組化檢測中廣泛應用，能夠明顯提高檢測的靈敏度。3、銀增強法：利用銀離子在特定條件下被還原成金屬銀的特性，可以在抗體上形成一層銀沉積物，從而放大信號。這種方法在免疫電鏡中特別有用，能夠觀察到更加清晰的免疫復合物結構。4、酶蛋白復合物法：通過將酶與抗體或其他蛋白質結合形成復合物，可以在檢測過程中產生更強的信號。這種方法結合了酶的催化活性和抗體的特異性，使得信號放大更加高效和準確。杭州組織芯片免疫組化實驗流程