免疫組化結果的強度半定量或定量分析方法概括為四點：1、視覺評分，如萊比錫系統按強度分級結合陽性比例評分，或HSCORE計算染色強度平均值。2、圖像分析軟件自動/半自動處理，量化顏色強度、分割陽性區域并統計分析。3、累積光密度(IOD)分析，累加特定顏色像素光密度以對比染色強度。4、機器學習與AI輔助，提升分析精度與效率。關鍵在于建立統一標準、確保分析一致性，包括參照區域選擇、拍照條件標準化及軟件校準，并設置陰/陽性對照驗證準確性。免疫組化技術不僅能用于基礎研究，也是臨床病理診斷不可或缺的方法之一。舟山多重免疫組化實驗流程

優化多重免疫組化背景高問題策略有以下幾點：1、優化封閉，使用血清或BSA預處理減少非特異結合。2、調整抗體濃度，通過滴定找濃度。3、縮短孵育時長和調低溫度。4、改善洗滌流程，加強去除未結合抗體。5、選擇高特異抗體，減少交叉反應。6、調整抗原修復條件，平衡暴露抗原與背景控制。7、選光譜分離好的熒光染料，用光譜成像減少串色。8、采用TSA等信號放大技術，增強特異信號。9、控制實驗條件一致性。10、實施陰性對照，確保結果特異性。嘉興多重免疫組化掃描免疫組化可幫助評估Tumor的惡性程度。

在免疫組化實驗中，單克隆抗體和多克隆抗體各有其優缺點，具體如下：單克隆抗體優點：高特異性：單克隆抗體只識別一個抗原表位，因此具有極高的特異性，減少了與其他蛋白的交叉反應。批間一致性：由于單克隆抗體來自同一克隆的B細胞，因此批次間差異小，實驗結果的重現性高。背景信號低：在免疫組化實驗中，單克隆抗體產生的背景信號通常較低，有利于準確觀察目標抗原的表達。單克隆抗體缺點：成本較高：單克隆抗體的制備過程相對復雜，成本也較高。對化學處理敏感：經過化學處理的抗原可能導致單克隆抗體識別的表位丟失，影響實驗結果。多克隆抗體優點：成本低廉：多克隆抗體的制備相對簡單，成本較低。識別多個表位：能夠識別抗原上的多個表位，提高檢測的靈敏度。對微小變化容忍度高：由于識別多個表位，多克隆抗體對抗原的微小變化具有更高的容忍度。多克隆抗體缺點：特異性較低：由于識別多個表位，多克隆抗體的特異性相對較低，可能導致與其他蛋白的交叉反應。批間差異大：由于每次免疫使用的動物和抗原成分可能存在差異，因此多克隆抗體批次間差異較大。

選擇抗體以確保免疫組化的特異性和敏感性時，應該考慮以下因素：1、特異性：查閱驗證數據、評估交叉反應性及表位匹配度。2、敏感性：選擇低檢測限、高親和力抗體。3、抗體類型：單克隆保證特異性，多克隆提升敏感性。4、應用兼容性：確保抗體適用IHC及樣本處理條件。5、種屬反應性：匹配實驗樣本物種。6、引用評價：參考文獻和用戶反饋，選好評抗體。7、供應商信譽：信賴信譽好的供應商。8、預實驗：進行預測試，設陰/陽性對照驗證。綜合考量確保抗體選擇的特異性和敏感性，提升實驗成功率和結果可靠性。利用免疫組化明確組織中抗原的分布。

幾種常用免疫組織化學方法的原理：1、免疫熒光方法：利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后即會發出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。2、免疫酶標方法：基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前常用的技術。3、免疫膠體金技術：免疫膠體金技術是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩定地吸附蛋白，對蛋白的生物學活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內的抗原進行定性、定位，甚至定量研究。免疫組化結合圖像分析軟件，可實現細胞定量分析，提高研究客觀性。舟山多重免疫組化實驗流程

利用免疫組化鑒定特定的基因產物。舟山多重免疫組化實驗流程

免疫組化即用型二步法的具體實驗流程步驟簡介：1、脫蠟、水化組織切片；2、根據所應用的一抗的特殊要求，對組織切片進行預處理；3、0.3%或3%H2O2去離子水孵育5分鐘-30分鐘，以阻斷內源性過氧化物酶，PBS或TBS沖洗；4、滴加一抗，室溫或37℃孵育30~60分鐘，或4℃過夜，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次；5、滴加enhangcer增強劑，37℃30min，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次；6、滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體，室溫/37℃孵育30分鐘-1h，PBS/TBS沖洗，3分鐘×5次；7、應用DAB溶液顯色；8、蒸餾水沖洗、復染、脫水、透明、封片。舟山多重免疫組化實驗流程