外泌體開始被認為是細胞排出代謝廢物的一種方式,能夠幫助缺乏高效降解能力或位于排泄系統的細胞排出不必要的蛋白質和RNA。近年來,隨著人們對外泌體的深入了解,外泌體的多種生物功能先后被發現。如今外泌體作為一種細胞間交流、傳遞大量的生物功能分子的重要方式日益受到重視。外泌體與受體細胞的信息交流可能通過以下4種途徑實現:(1)外泌體表面膜蛋白質被目的細胞表面的受體識別,從而激huo靶細胞;(2)外泌體在蛋白酶作用下產生的表面膜蛋白質碎片可作為目的細胞表面受體的配體;(3)外泌體脂膜可以與目的細胞膜融合,將蛋白質和RNA等內容物釋放進去,此類膜融合可能改變靶細胞的一些膜特性,例如脂質和膜蛋白質的密度及種類;(4)目的細胞通過胞吞的形式攝入外泌體。外泌體是一種由活細胞分泌的,直徑約為40~160nm的具有雙層膜結構的生物活性囊泡。浙江外泌體測序
流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記,可用流式細胞儀檢測到陽性表達,從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液,當外泌體濃度高或分離過程中發生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒,從而導致數據不準確。因此,為了通過流式細胞儀觀察,需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上,從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯抗體中。在流式細胞術之前,可以在落射熒光顯微鏡(EPI)下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號,不只可以對外泌體進行高通量分析,還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。浙江外泌體測序外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進瘤子發生和轉移等作用。
Vlassov等人發表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹,通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后,10000xg離心1h,可將直徑在30-150nm之間,且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體,為了進一步純化胎盤相關外泌體,將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后,加入非線性蔗糖密度梯度層,10000xg超速離心5h,將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經過多次實驗反復驗證,確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。
circZKSCAN1在肝ai細胞中低表達且抑制肝ai細胞的增殖,ciRS-7則被認為是非小細胞肺ai、結腸ai和胃ai等中流的預后指標,其高表達與較高的臨床分期和較差的總體生存期相關。目前已發現組織、血液和外泌體中的circRNA分子表達失調,而多種circRNA的聯合檢測會提高外泌體標志物的敏感性和特異性,甚至可達到90%左右。外泌體可作為納米載體來介導細胞間的信息傳遞,發揮信息傳遞作用的方式主要有:在細胞間轉移受體,通過配體受體介導的方式作用于受體細胞,向受體細胞轉移功能蛋白,通過膜融合方式向受體細胞傳遞mRNA、miRNAs或轉錄因子等信息。這些方式為中流靶向zhiliao開辟了新的途徑。臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。
外泌體的提取方法:免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不寬泛。外泌體由于包含的內容物具有明顯的組織特異性,為其能成為瘤早期診斷的生物標志物提供了重要保障。浙江外泌體測序
外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經系統是外泌體遞送藥物的一個明顯優勢。浙江外泌體測序
外泌體本身的惰性相當高,但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學功能,因此,外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質的天然載體也引起了藥物遞送領域的極大興趣,因為它可以利用這些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統的技術突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規模工業化生產還面臨很大的挑戰。首先,對外泌體的具體合成機制、功能了解并不是非常詳細。其次,現在缺乏經濟有效的外泌體分離技術。浙江外泌體測序
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