尋找肝臟疾病的新型分子標志物一直是研究熱點,也是難點。不同肝臟疾病中,細胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。這些不同生理狀態下外泌體所攜帶的特異性蛋白分子、miRNA等,是潛在的分子診斷和預后標志物。肝細胞患者中,血清外泌體miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明顯上升,miR-101、-106b、-122和miR-195明顯下降。而HCC患者肝移植復發后,血清外泌體miR-718水平明顯下降。除外泌體外,微泡也有可能作為新型標志物,研究發現HCV患病者中CD4+和CD8+T細胞來源的微泡含量上升;而肝臟干細胞分泌的微泡中多種miRNAs上調。從外泌體中篩選的生物標志物,可用于疾病的診斷、預后及治理。福建外泌體circRNA測序
在當代準確醫療的大趨勢下,外泌體的發現和研究為肺病的早期診斷和醫治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發現和早期診療提供可靠依據。根據種瘤來源的外泌體在肺病的發發展和侵襲轉移過程中的作用及相關機制的研究,臨床醫療人員可以針對不同的患者制定合適的醫治方案,以達到改善肺病患者生存率,延長肺病患者生存時間的目的。但是,針對外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,如:外泌體的純化及標記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機制及信號通路等。總而言之,外泌體的研究有著廣闊的前景,基于外泌體與肺病的研究,有望研發出能夠應用于肺病臨床診斷和醫治的有效措施,造福更多的患者。福建外泌體circRNA測序外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。
Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質細胞來源外泌體與胰腺ai細胞共培養,發現裝載紫杉醇的間充質細胞外泌體具有很強的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性,采用小鼠未成熟樹突狀細胞所產生外泌體作為藥物載體。同時為實現外泌體運輸的靶向性,使細胞表達能夠識別乳腺ai細胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b,溶酶體相關膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法,在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細胞外泌體中載入阿霉素。結果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織,抑制中流生長且無明顯毒性。
研究采用蔗糖密度梯度離心聯合2次PEG6000沉淀,極大地降低了外泌體的提取成本,且獲得的外泌體不僅表達外泌體公認的標志蛋白分子,同時也表達胎盤特異性蛋白分子,證明通過這種方法獲得的外泌體是胎盤來源外泌體。通過蔗糖密度梯度離心后得到的外泌體沉淀經蛋白質SDS-PAGE膠電泳,銀染后可見各蛋白分子條帶清晰可見,動態光散射分析粒徑,結果顯示獲得的外泌體顆粒粒徑大部分分布于28-91nm之間,與文獻報道外泌體顆粒大小相一致。胎盤外泌體經過PKH67熒光染料染色后,與細胞共孵育,熒光顯微鏡下觀察外泌體具備進入細胞的活性,進一步驗證了我們應用此種改良的分離方法可有效的獲得胎盤來源的外泌體。本研究通過蔗糖密度梯度離心聯合2次PEG6000沉淀成功分離得到母體血清中胎盤來源外泌體,并從蛋白標志分子、電鏡、粒徑及分布、進入細胞活性四方面對其進行了鑒定,為研究妊娠期間胎盤外泌體在正常妊娠及胎盤源性并發癥中的作用奠定了基礎。細胞表面受體表達不同,外泌體對受體細胞的影響可能不同,可能誘導細胞存活,也可能誘導凋亡或免疫調節等。
外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統的技術突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規模工業化生產面臨很大的挑戰。外泌體(exosome)是細胞分泌囊泡(extracellularvesicles)的一種亞型,存在于生物體液中,并參與多種生理和病理過程。外泌體被認為是細胞間通信的一種新機制,允許細胞交換蛋白質、脂質和遺傳物質。過去,細胞分泌的外泌體一度被認為只是參與廢物排泄;現在,隨著高通量蛋白質組學和基因組學的發展,外泌體被寬泛認為是生物體內細胞間短距離和長距離交流的高度保守的途徑,這種細胞間通信對于正常細胞和瘤細胞都是非常重要的。1983年,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現。福建外泌體circRNA測序
在從體液中提取外泌體后,體液可長期穩定保存。福建外泌體circRNA測序
外泌體作為疾病診斷的標志物具有其獨特優勢:(1)與正常細胞相比,病變細胞產生的外泌體在分泌量和內容物方面存在明顯差異。病變的細胞和組織能夠產生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式,外泌體的組成不同于來源細胞。其內包含的一些特異性蛋白質能夠揭示外泌體的起源、結構和運輸方式,有利于深入了解外泌體的產生機制。(3)病變細胞分泌的外泌體通過胞吐的過程進入血液、尿液等體液,囊泡狀結構能夠保護外泌體內部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾,有利于保持其結構完整和生物活性,通過對此類體液進行分析可以實現疾病的無創或微創檢測。福建外泌體circRNA測序
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