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血漿血清提取試劑盒原理

來源: 發(fā)布時間:2023年06月05日

在Rameshwar等的研究中,采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞的方法,使外泌體載有anti-miR-9。在進行間充質(zhì)細胞和多形性成角質(zhì)細胞瘤(GBM)細胞間anti-miR-9傳遞的實驗時,發(fā)現(xiàn)兩種細胞不僅可以通過縫隙連接介導(dǎo)的細胞間通訊(GJIC)也可以通過外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細胞(U87和T98G)對中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實現(xiàn),而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9,顯示出外泌體在運載miRNA進行基因zhiliao時的潛力。利用外泌體進行GBM的zhiliao不只停留在體外細胞實驗上,也已經(jīng)有相關(guān)的體內(nèi)zhiliao報道。外泌體又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。血漿血清提取試劑盒原理

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外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個關(guān)鍵的檢查點:ILV的形成,阻止MVEs的降解以及MVEs和細胞膜的融合,這三個檢查點都包含在內(nèi)體相關(guān)的囊泡運輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結(jié)構(gòu)的表面,通過招募效應(yīng)因子來調(diào)節(jié)相應(yīng)膜結(jié)構(gòu)的囊泡運輸,例如,在內(nèi)體溶酶體運輸網(wǎng)絡(luò)中,RAB5調(diào)節(jié)早期內(nèi)體的形成及相互融合;內(nèi)體膜上RAB5到RAB7的轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)早期向晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變;RAB7調(diào)節(jié)晚期內(nèi)體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs;RAB27調(diào)節(jié)MVEs與細胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內(nèi)吞的膜蛋白,特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體,定位到內(nèi)體和MVEs,通過MVEs和溶酶體融合來進入溶酶體降解,此過程受多種RABGTPases和ESCRT復(fù)合體的調(diào)控。血漿血清提取試劑盒原理外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,從而活躍細胞內(nèi)的信號通路。

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Exosome(外泌體)是由活細胞分泌小囊泡,具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu);參與細胞之間的交流,物質(zhì)的運輸以及正常生理過程的維持,此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。對分離的外泌體進行體外標記或示蹤,有助于對外泌體的功能進行進一步的研究。目前對于外泌體的標記方法有很多種,包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67,PKH-26具有更長的半衰期,標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細胞跟蹤研究。

外泌體作為藥物遞送載體較以往的合成系統(tǒng)具有多方面的優(yōu)勢,比如:人工遞送載體具有更低的免疫原性,其含有的磷脂雙分子層可與靶細胞細胞膜融合,從而避廉價核巨噬細胞系統(tǒng)的吞噬作用。Srivastava等開發(fā)了一種基于外泌體-金奈米粒子(Exo-GNP)的藥物遞送系統(tǒng)—“nanosomes”用于肺病的醫(yī)治,研究表明該系統(tǒng)與單用多柔比星醫(yī)治相比,前者的多柔比星釋放量增加、攝取率提高、化療毒性降低且化療效果增強。此外,還有研究發(fā)現(xiàn),使用外泌體運載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細胞對PTX的吸收,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細胞毒性,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制。

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外泌體是由細胞細胞質(zhì)內(nèi)的晚期內(nèi)泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細胞外環(huán)境的一種直徑30-100nm的微型囊泡,其形態(tài)規(guī)則,呈圓形或橢圓形杯狀結(jié)構(gòu),不同類型細胞分泌的外泌體具有很多共性,包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白,如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等,表面為類似于細胞膜的脂質(zhì)雙分子層,具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質(zhì)等生物活性分子,并在細胞外環(huán)境穩(wěn)定存在,而且通過傳遞供體細胞信息,調(diào)節(jié)靶細胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細胞分泌,妊娠期母體血清中存在表達胎盤堿性磷酸酶(placentalalkalinephosphatase,)的胎盤來源外泌體,并且在妊娠中發(fā)揮重要的作用。外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,進而喚醒靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。血漿血清提取試劑盒原理

外泌體的提取的方式:過濾離心。血漿血清提取試劑盒原理

當(dāng)外泌體在第1次被發(fā)現(xiàn)的時候,外泌體被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運輸、細胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、瘤侵襲等方方面面。有研究表明瘤來源的外泌體參與到瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進了瘤的生長與侵襲。血漿血清提取試劑盒原理

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