胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實驗證明,經過正確處理的熱滅活胎牛血清,對于大多數的細胞而言都是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至可能因為高溫處理影響了血清的質量,從而造成細胞生長速率的降低。經過熱處理的血清,沉淀物的形成會明顯的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此類沉淀物增加得更多,這常常會使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議客戶,若非必須,可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省客戶寶貴的時間,更確保血清的質量。血清的主要作用是提供基本營養物質、提供和各種生長因子、提供結合蛋白。溫州優級血清廠家
如何區別真假胎牛血清:免疫球蛋白,國產血清的只是定性檢測,結果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數值能完全體現出時的牛齡情況,國產血清,基本都是新生牛的,血清中容易產生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。其它不管是國產還是進口血清,都是不測Antibiotic的(無四環素胎牛血清之外)。國外,Antibiotic的使用很嚴格,用量也很少,每頭奶牛的產品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含Antibiotic或含量極低;國內,Antibiotic的濫用已成了普遍現象,血清中殘留很高,對細胞培養極為不利,這是國產血清質量差的根本原因。溫州優級血清廠家胎牛血清不推薦做熱滅活,因為胎牛還未有發育完全的補體系統。
胎牛血清融化方法:只要2.5個小時,溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節約了時間,而且較大限度減少了血清沉淀出現的幾率。血清融化過程中,蛋白質會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白,血清在培養細胞中,比較重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中較大限度地保留因子的活性,就變得非常重要。回憶一下,細胞復蘇時,要保持細胞的活性,我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢?快融!血清同樣如此!三步法需要兩個半小時,4℃過夜需要大約10個小時(冰箱一般設2-8℃,所以各實驗室融化時間會稍有出入)。
胎牛血清在細胞培養中的作用:1.提供對維持細胞指數生長的Hormone,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,能結合或調節它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到釋放毒性作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。7.參與細胞凍存。在細胞培養中,胎牛血清加入基礎培養基的濃度大多為5%~20%(常見為10%)的。具體到不同試驗,應依據文獻報導,或細胞類型或基礎培養基的成分來確定較佳濃度。胎牛血清應在-20℃儲存,運輸應干冰冷鏈運輸,避免反復凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優良品質。因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較少。
胎牛血清的功能:胎牛血清是細胞培養中用量較大的天然培養基,含有豐富的細胞生長必須的營養成份,常用于動物細胞的體外培養,具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的Hormone,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,能結合或調變它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到釋放毒性作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。胎牛血清非常適合各種細胞的培養。溫州優級血清廠家
胎牛血清的細菌內有毒的 ≤5(EU/ml);牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性。溫州優級血清廠家
胎牛血清制備:離心,將準備好的瓶放入離心套筒調好平衡后,對稱放入離心機,按1800轉/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機抽氣口上。打開壓縮機,用抽血清孔的管子輕輕抽取采的血瓶內的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。溫州優級血清廠家
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