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外泌體鑒定方法

來源: 發(fā)布時間:2023年06月18日

在利用外泌體運輸PTX進行抗中流的研究中,由于間充質干細胞可以歸巢(homing)至中流細胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對PTX運輸,因此Pessina等采用間充質干細胞SR4987作為分泌外泌體的母代細胞,而后將SR4987與PTX共混,使SR4987分泌的外泌體含有PTX,再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來,研究其對體外人胰腺ai細胞株的影響。結果表明外泌體可以有效的運載PTX并不破壞其功能,小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質濃度在0.047~0.095mg/mL之間時可以誘導中流細胞凋亡50%,這種抑制效果與純PTX對體外ai細胞的抑制效果相當。有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。外泌體鑒定方法

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一方面,外泌體可以通過調控細胞的惡性轉化如細胞增殖、遷移和侵襲,促進HCC的發(fā)生和發(fā)展。另一方面,惡性瘤細胞分泌的外泌體可以協(xié)同其他瘤細胞一起,調控瘤微環(huán)境,以利于HCC發(fā)展。人HCC細胞外泌體中含有的一系列miRNAs,會減弱其他HCC細胞中TGF-β通路上的蛋白表達,促進HCC細胞的生長。HCC細胞外泌體還會誘導非致瘤性肝細胞發(fā)生細胞遷移和侵襲,具有運動能力的HCC通過釋放外泌體誘導肝細胞分泌MMP-2和MMP-9,增強HCC細胞的侵襲能力。經HCC中分離到的CD90+外泌體處理的內皮細胞會表達更多的VEGF和VEGFR1,促進血管生成;同時誘導ICAM-1表達促進細胞轉移。還有研究表明外泌體參與HCC缺氧脅迫和藥物耐受的調控。外泌體鑒定方法外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而喚醒靶細胞細胞內的信號通路。

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外泌體由于包含的內容物具有明顯的組織特異性,為其能成為瘤早期診斷的生物標志物提供了重要保障。但目前對于外泌體miRNA、LnkRNA等的檢測方法還不成熟,限制了外泌體用于疾病診斷中的應用。基于外泌體的診斷產品獲得FDA批準上市,很大程度的增加了研發(fā)企業(yè)的信心。外泌體的異質性又決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)不能提供一個普適的遞藥策略,必須根據(jù)所傳遞治理物質的類型、目標組織的特點等進行針對性的進行策略調整。良好的生物兼容性、穩(wěn)定性和內在靶向性等使外泌體在藥物遞送方向大有潛力。

外泌體可以調控星狀細胞(HSC)活化,并參與HSC細胞遷移的進程。活化的HSC來源的外泌體中,CCN2表達升高,Twist1和miR-214表達被抑制,這些外泌體還能誘導靜止的HSC細胞表達CCN2。此外,Twist1可以誘導miR-214表達從而抑制CCN2的表達。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會誘導HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程,這可能成為肝纖維化治理的靶點。研究顯示,CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號通路的活化,抑制纖維化;而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉細胞形態(tài)和TGF-β1誘導的EMT進程,減弱肝纖維化。外泌體可以直接進入受體細胞影響細胞功能。

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外泌體介導中流耐藥性:中流細胞來源的外泌體中某些miRNAs和non-codingRNAs(lncRNA)的變化在中流化療抗藥性的發(fā)生中起重要作用。Qu等研究發(fā)現(xiàn)lncRNA可以通過競爭性結合miR-34/miR-449,促進晚期腎細胞ai細胞中的跨膜受體酪氨酸激酶anexelekto(AXL)和tyrosine[1]proteinkinaseMet(c-MET)表達,引發(fā)舒尼替尼耐藥。而外泌體能夠將這一lncRNA運輸至舒尼替尼敏感的ai細胞,從而傳播舒尼替尼的抗性。外泌體中的miR21能夠抑制卵巢ai細胞凋亡,并通過結合肌動蛋白絲相關蛋白凋亡酶激huo因子(apoptoticproteaseactivatingfactor1,APAF1)使得卵巢ai細胞產生對紫杉醇的抗藥性。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。外泌體鑒定方法

尚未完全發(fā)現(xiàn)調節(jié)外泌體細胞結合的途徑。外泌體鑒定方法

中流細胞分泌的外泌體可以通過體液進入特定qi官,建立有利于ai細胞生長的微環(huán)境,包括促進受體細胞上皮細胞-間充質轉化、引發(fā)炎癥、促進血管生成,為ai細胞的擴散形成有利條件。進一步研究發(fā)現(xiàn)中流細胞外泌體能夠引導ai癥轉移至特定qi官,在膜表面特異性整合素的作用下,中流細胞外泌體首先在特定的qi官累積,引起受體qi官產生炎癥、生成血管,形成有利于中流轉移的微環(huán)境,使得中流細胞更容易轉移至該qi官。Maji等揭示了惡性中流細胞外泌體中的AnnexinⅡ蛋白能夠促進血管生成,為中流轉移創(chuàng)造有利的微環(huán)境。外泌體鑒定方法

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