外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細胞的增殖、再生和遷移等生理過程,在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用,如肝病、肝硬化、肝纖維化、酒精性脂肪肝等。抑制或阻止外泌體的分泌,或許是治理肝臟疾病的一種新型策略。此外,外泌體具有穩定性和生物安全性,也可以用作載體攜帶改造的基因或藥物,或用作疫苗誘導免疫反應殺死瘤細胞。外泌體會起到一定的保護作用,抵抗病毒的作用。與HCV類似,HBV患者的血清中分離到的外泌體同樣攜帶HBV核酸分子和蛋白質。HBV陽性的外泌體會主動轉移HBV到肝細胞中。外泌體中HBV核酸分子還會抑制RIG-1和下游信號通路,導致NK細胞功能紊亂。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍。杭州外泌體攝取
外泌體是具有雙層脂膜的囊泡結構,其穩定性較好,可保護內部生物分子免受體液中各種酶的影響,從而保持其完整性和生物活性。外泌體被提取后一般懸浮于磷酸鹽緩沖液。目前,常用的儲存方法為冷凍保存,但是冷凍保存可能會導致外泌體形狀與物理性質的改變,也可能導致多層囊泡的形成和聚集,反復凍融會導致外泌體表面分子的生物特性、含量和標志物組成發生變化。血清中包含外泌體在內的細胞外囊泡DNA在不同儲存環境可保持穩定,血漿存放于4°C時其RNA會明顯降解,在–20°C下長期保存也會導致血漿中外泌體總RNA降解,但miRNA卻十分穩定,這也提示了外泌體miRNA作為生物標志物的潛力。杭州外泌體攝取外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。
胃病作為一種常見的惡性瘤,在亞洲具有較高的發病率.胃病的臨床診斷方法與結腸病相同,主要依靠內窺鏡,早期胃病的癥狀并不明顯,且臨床常用的瘤標志物對胃病患者特異性與敏感性均較差,因此,胃病往往發現于晚期,并伴有不同程度的轉移。研究者發現胃病細胞高表達CD97并可經外泌體分泌的方式調節瘤細胞的MAPK信號通路,促進瘤細胞的增殖與侵襲。外泌體中CD97的檢測成或許能成為一種有潛在價值的胃病診療工具。胃病細胞能選擇性地將let-7包裝到外泌體中,并釋放至周圍環境中,促進胃病的惡性進展。胃病細胞外泌體可作用于抗瘤的T細胞,抑制AKT的活性。外泌體與免疫細胞之間的相互作用揭示了瘤抑制免疫功能的潛在機制。在另一項被認為有潛在胃病診斷價值的lnRNA的研究中,通過對胃病患者、胃上皮異型增生與健康人的比較發現,LINC00152在胃病患者的血液中可被檢測到高表達,且手術前后有明顯變化。血清LINC00152主要存在于外泌體中,在外泌體的保護下,可以穩定保存,血清外泌體LINC00152具有胃病標志物的潛能。
外泌體的形成始于細胞內陷,成熟于多囊泡胞內體,終于膜融合。細胞通過內吞作用產生小囊泡,小囊泡融合形成早期胞內體(earlyendosome),在多個蛋白的協同調控下,早期胞內體出芽形成含有多個腔內小囊泡的多泡體(multivesicularbodies,MVB),這個過程中這些腔內小囊泡(intraluminalvesicles,ILVs)會裝載各種核酸和蛋白質等分子,泡內體較后在GTPase家族中RAB酶的調節下與細胞膜融合。隨后,這些小囊泡會被釋放到細胞外,稱為外泌體。外泌體是通過細胞內吞細胞膜融合主動排除的物質,大小均勻,而微泡是由細胞直接出芽脫落生成,大小不均一。外泌體的數量:人體中大約有1014個,近乎于平均每個細胞產生1000-10000個。
研究者利用電穿孔法對外泌體進行DOX的負載,進行體內抗中流效果的研究。實驗結果顯示,負載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠優于單純的DOX。直接靜脈注射DOX,其不僅水溶性低,而且容易使DOX與血液中的蛋白結合,從而被網狀內皮系統識別捕獲,起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護DOX,可以提高DOX水溶性,避免被網狀內皮系統捕捉,提高靶向性,從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性,起到更好的抗中流效果。超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。杭州外泌體攝取
外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。杭州外泌體攝取
獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數目和粒徑分布的測量,但兩種方法也各有不足。動態光散射法中散射光強度依賴于顆粒質量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果,因此動態光散射法更適用于單分散體系。而且動態光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時,為了得到準確的濃度和粒徑信息,需要根據所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準,操作繁瑣。受檢測靈敏度所限,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析,難以區分合成的納米材料、大蛋白質聚合體和生物囊泡。杭州外泌體攝取
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