胎牛血清制備:離心,將準(zhǔn)備好的瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對(duì)稱放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫(kù)備用。抽血清,取出4℃冷庫(kù)離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機(jī)抽氣口上。打開壓縮機(jī),用抽血清孔的管子輕輕抽取采的血瓶?jī)?nèi)的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫(kù)冷藏備用。胎牛血清提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等。麗水去外泌體血清哪里有
如何區(qū)別真假胎牛血清:1、血紅蛋白,標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。2、pH,國(guó)產(chǎn)血清,大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān),這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性的病毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1um過濾,大多也能清理。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清理,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性的病毒,特別是BVDV,在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。麗水去外泌體血清哪里有透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。
胎牛血清的處理方法主要有以下幾種:1.活性炭處理,活性炭可以與親脂性分子結(jié)合,因此已用于從FBS中去除Hormone,例如雄雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮、三碘甲狀腺原氨酸(T3)和甲狀腺素(T4)。這些血清脂質(zhì)Hormone傾向于干擾免疫測(cè)定系統(tǒng)和胰島素測(cè)定方法。2.透析,透析可以從FBS中去除所有分子量小于10,000MW的分子。這包括極性和非極性分子。去除細(xì)胞因子、葡萄糖、氨基酸和許多其他物質(zhì)。透析還可以去除FBS中的Antibiotic和其他外源性分子。
細(xì)胞培養(yǎng)用到的胎牛血清需要滅活嗎:細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清是不可或缺重要培養(yǎng)基,胎牛血清中含有諸多細(xì)胞生長(zhǎng)因子,維生素,氨基酸等物質(zhì)。我們常會(huì)看到胎牛血清的標(biāo)注上有對(duì)產(chǎn)品滅活也有沒有滅活的,胎牛血清為什么不需要熱滅活便可以使用。事實(shí)上,熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對(duì)補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。胎牛血清中含有的C1,C6單單達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分單單有成年動(dòng)物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。胎牛血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
胎牛血清:胎牛血清(FBS),胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量3.5%~5.0%(w/v)。3、血紅蛋白含量≤0.02%(w/v)。4、無菌檢驗(yàn)陰性。5、支原體檢驗(yàn)陰性。6、細(xì)菌內(nèi)的毒性≤5(EU/ml)。7、牛腹瀉病毒陰性。8、大腸桿菌噬菌體陰性。9、支持細(xì)胞增殖(Sp2/0-Ag14)生長(zhǎng)曲線(接種濃度)較大增殖濃度≥2.5×106個(gè)/ml,細(xì)胞倍增時(shí)間≤15h克隆率≥85%。胎牛血清中含有大量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)必需的生長(zhǎng)因子。麗水去外泌體血清哪里有
血清白蛋白是胎牛血清的主要成分。麗水去外泌體血清哪里有
胎牛血清的意義:胎牛血清是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血,豐富的生長(zhǎng)發(fā)育因子,胎牛血清非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的天然培養(yǎng)基,胎牛血清起到為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)、支持、保護(hù)的作用。好的的胎牛血清是讓細(xì)胞“快樂成長(zhǎng)”的必備營(yíng)養(yǎng)物,但劣質(zhì)的胎牛血清,也可能會(huì)成為導(dǎo)致細(xì)胞死亡的“定時(shí)炸雷”。因此,挑選需要擦亮們的雙眼。蛋白含量,總蛋白含量:胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,可能說明牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻入水或者其他溶劑。血紅蛋白含量:標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。免疫球蛋白:免疫球蛋白的數(shù)值能側(cè)面反映出時(shí)的牛齡情況,新生牛血清中容易檢出IgM,IgG的含量也偏高,胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。麗水去外泌體血清哪里有
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