胎牛血清:胎牛血清(FBS),胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質含量3.5%~5.0%(w/v)。3、血紅蛋白含量≤0.02%(w/v)。4、無菌檢驗陰性。5、支原體檢驗陰性。6、細菌內的毒性≤5(EU/ml)。7、牛腹瀉病毒陰性。8、大腸桿菌噬菌體陰性。9、支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14)生長曲線(接種濃度)較大增殖濃度≥2.5×106個/ml,細胞倍增時間≤15h克隆率≥85%。胎牛血清起到為細胞提供營養、支持、保護的作用。深圳無外泌體血清哪家好
如何區別真假胎牛血清:1、血紅蛋白,標準為不高于20mg/dl,顏色越紅,數值越高,反之,數值越低。2、pH,國產血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關,這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性的病毒等。隨著國內血清廠家生產條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經過0.1um過濾,大多也能清理。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產環境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清理,但對血清質量影響不大。病原性的病毒,特別是BVDV,在國產血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產血清質量的重要因素之一,而進口胎牛血清中基本都控制的很好。深圳無外泌體血清哪家好胎牛血清不推薦做熱滅活,因為胎牛還未有發育完全的補體系統。
胎牛血清的生產工藝:胎牛血清適合脈沖示蹤實驗(同位素標記研究細胞代謝)適合轉染CHO后的篩選,避免外源小分子對細胞產生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎上進行加工的。胎牛血清在無菌條件下要經過0.1微米膜三重過濾,要進行一系列的檢測,包括理化性質檢查(如滲透壓和pH值),成分檢查(如內的毒性和血紅蛋白)、外源因子檢查(如細菌、病毒和支原體)以及促進細胞增殖的檢查等。透析胎牛血清為保證其性能和安全性,也需具備胎牛血清的這些工藝和檢查。
為什么要熱滅活胎牛血清?胎牛血清加熱可以滅活補體系統。開啟的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,開啟淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活胎牛血清。為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現少量沉淀?胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。胎牛血清非常適合各種細胞的培養。
胎牛血清制備:離心,將準備好的瓶放入離心套筒調好平衡后,對稱放入離心機,按1800轉/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機抽氣口上。打開壓縮機,用抽血清孔的管子輕輕抽取采的血瓶內的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。細胞培養胎牛血清是不可或缺重要培養基。深圳無外泌體血清哪家好
胎牛血清在水浴過程中,胎牛血清的液面要完全浸在水中。深圳無外泌體血清哪家好
用于體外細胞培養的胎牛血清及其制備方法:將已存放血漿的試管置入-20~0℃環境下保存備用;將血漿分離提取胎牛血清,具體步驟如下:取6-12g氯化鈉、0.1-0.5g磷酸二氫鉀和1.4-2.4g磷酸二氫鉀放入容器中,向其中加入300-700mL去離子水,攪拌均勻,使用質量分數為10-20%的鹽酸溶液調節pH為7.0-7.3,將上述所收集的血漿倒入容器中,攪拌均勻,溫度設定為25-38℃,靜置8-20min,得混合液C;22)將上述的混合液C放入離心機中離心分離8-20min,轉速設定為3000-10000r/min,取上清液。深圳無外泌體血清哪家好
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