雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優勢，但在臨床應用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標準仍然是差速離心法，但這種方法費時費力且提取效率較低，難以進行臨床推廣和應用；而商業化的試劑盒質量參差不齊，往往導致提取物雜質過多，且其售價較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量，目前仍存有爭議。由于傳統的內參并不適用于外泌體，在實時熒光定量PCR檢測靶分子含量時內參的選擇尚沒有統一的標準。外泌體分子標志物的研究還處于初級階段。目前外泌體研究的整個流程中成本都很高。有關外泌體分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。細胞外泌體的作用

外泌體研究可以指導診治肝損傷、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝臟疾病。藥物誘導肝損傷（DILI）大鼠模型中，尿外泌體中的蛋白含量減少，包括CD26、CD81和其他潛在的標志物蛋白。而另一項研究則發現DILI大鼠血清中分離到的外泌體含有更高水平的蛋白，如HSP70、HSP90等。MSCs來源的外泌體可以誘導肝細胞增殖相關基因表達，減弱CCL4誘導的肝損傷。而酒精刺激會促進外泌體的分泌，miRNAs水平也會升高，并促進細胞因子的分泌，喚醒單核細胞的分化。盡管已取得上述成果，我們對外泌體的研究尚不夠深入，外泌體在肝臟生理和病理中的重要作用及其臨床應用仍有待繼續探索。細胞外泌體的作用PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上。

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，形態也呈現出多樣性。長鏈非編碼RNA（longnon-codingRNA）是一類轉錄本長度超過200nt、不編碼蛋白的RNA。近年來的研究表明lncRNA能在標貫遺傳、轉錄及轉錄后水平上調控基因表達，參與了X染色體沉默、基因組印記以及染色質修飾、轉錄jihuo、轉錄干擾、核內運輸等多種重要的調控過程，與人類疾病的發生、發展和防治都有著密切聯系。lncRNA芯片對lncRNA進行功能研究也被更多的關注，通過設計不同的lncRNA探針，可以更加快速、高通量地篩選出疾病或特定生物學過程中差異表達的lncRNA和mRNA信息，找到lncRNA的靶基因位點深入分析調控機制。

通過改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細胞培養液中沉淀出來。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力,從而迫使其脫離溶液,進而在低速離心條件下發生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結合蛋白,可通過與外泌體質膜糖蛋白上的糖鏈結合來改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚精蛋白、醋酸鈉、有機溶劑沉淀等方法進行沉淀分離。外泌體作為細胞間信號傳導的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話題比較熱門。

外泌體（Exosome）介導瘤血管的形成和轉移。外泌體（Exosome）能將自身的細胞因子IL-8和VEGF釋放到細胞外，作用于內皮細胞膜表面受體，導致瘤血管快速形成并較終通過發生EMT過程促進瘤的遷移。瘤細胞來源的外泌體（Exosome）中含有血管生長素、血管內皮生長因子等，這些細胞因子以不同的作用方式促進瘤血管的形成，如VEGF通過喚醒磷酸酯酶C和第二信使的形成，誘導纖維蛋白溶解酶原活化物的表達，使得基底膜降解，從而促進瘤細胞的遷移。泌體是細胞內源性的小囊泡，由大多數細胞分泌。細胞外泌體的作用

免疫印跡法（WB）和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法。細胞外泌體的作用

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據顆粒的沉降速率分離,介質密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區帶,則會根據樣品液中各種溶質成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區帶,而不會沉淀到底部。細胞外泌體的作用

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