獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數目和粒徑分布的測量,但兩種方法也各有不足。動態光散射法中散射光強度依賴于顆粒質量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果,因此動態光散射法更適用于單分散體系。而且動態光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時,為了得到準確的濃度和粒徑信息,需要根據所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準,操作繁瑣。受檢測靈敏度所限,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析,難以區分合成的納米材料、大蛋白質聚合體和生物囊泡。從外泌體中篩選的生物標志物,可用于疾病的診斷、預后及治理。羊水提取試劑盒步驟
外泌體由于包含的內容物具有明顯的組織特異性,為其能成為瘤早期診斷的生物標志物提供了重要保障。但目前對于外泌體miRNA、LnkRNA等的檢測方法還不成熟,限制了外泌體用于疾病診斷中的應用。基于外泌體的診斷產品獲得FDA批準上市,很大程度的增加了研發企業的信心。外泌體的異質性又決定了外泌體藥物遞送系統不能提供一個普適的遞藥策略,必須根據所傳遞治理物質的類型、目標組織的特點等進行針對性的進行策略調整。良好的生物兼容性、穩定性和內在靶向性等使外泌體在藥物遞送方向大有潛力。羊水提取試劑盒步驟臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。
雖然外泌體作為藥物載體具有生物兼容性、穩定性和內在靶向性等潛在優勢,但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步,尚有許多問題需解決:選擇何種細胞作為外泌體的供體:如DCs來源的外泌體可用于免疫治理,因其富含組織相容復合物(MHC)及T細胞共刺激分子,能在體內喚醒T淋巴細胞,進而抑制瘤細胞增殖;骨髓來源的間充質干細胞(MSCs)來源的外泌體對KRAS基因有抑制作用;γδT細胞、自然殺傷細胞(NK)、瘤細胞等均有研究報道可作為載藥級別外泌體的細胞來源。
在20世紀80年代,外泌體被描述為從網織紅細胞分泌的內體來源的囊泡。人們對這些細胞外囊泡的興趣逐漸增加,因為它們似乎參與了很多細胞過程。外泌體攜帶蛋白質、脂質和RNAs,介導體內不同細胞類型之間的細胞間通訊,從而影響正常和病理狀態。只有近,科學家才認識到將外泌體與其他類型的細胞外囊泡分開的困難,這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復雜但正在發展的科學領域,該綜述著重于外泌體和其他分泌的細胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發生,分泌及其后續的命運,因為它們的功能依賴于這些重要過程。外泌體作為細胞間信號傳導的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話題比較熱門。
外泌體的提取方法:超速離心法,這是外泌體提取比較常用的方法。超速離心法得到的外泌的體量比較多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡而不是外泌體。過濾離心法,這種操作簡單、省時,不會影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期的準備工作繁雜,比較耗時,量少。外泌體研究相對困難,需要盡快開發操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。羊水提取試劑盒步驟
外泌體又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。羊水提取試劑盒步驟
外泌體本身的惰性相當高,但它們與細胞膜融合可將所攜帶的物質和信號傳遞到受體細胞并改變其生物學功能,因此,外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質的天然載體也引起了藥物遞送領域的極大興趣,因為它可以利用這些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統的技術突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規模工業化生產還面臨很大的挑戰。首先,對外泌體的具體合成機制、功能了解并不是非常詳細。其次,現在缺乏經濟有效的外泌體分離技術。羊水提取試劑盒步驟
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