外泌體含有的信號(hào)分子能反映分泌細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),甚至還會(huì)包含細(xì)胞病態(tài)相關(guān)的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標(biāo)志物分子源。瘤細(xì)胞分泌的外泌體通過(guò)對(duì)大分子物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和傳遞調(diào)節(jié)臨近或遠(yuǎn)處瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境,對(duì)促瘤生成及瘤增生、轉(zhuǎn)移發(fā)揮著不同的調(diào)節(jié)作用。瘤細(xì)胞分泌的外泌體還可以通過(guò)誘導(dǎo)耐藥和免疫抑制來(lái)促進(jìn)瘤的發(fā)展。外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長(zhǎng)時(shí)間,這些特點(diǎn)使得外泌體可應(yīng)用于瘤的早期診斷和預(yù)后判斷。靶向瘤的外泌體的標(biāo)志物可能為瘤疾病的診斷和治理提供新的指標(biāo)和途徑,對(duì)高危人群早期診斷和早期治理以降低或減緩瘤病例的發(fā)生上發(fā)揮著重要的作用。泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡，由大多數(shù)細(xì)胞分泌。海洋生物外泌體iTRAQ

外泌體在神經(jīng)系統(tǒng)中與神經(jīng)回路的控制相關(guān)，同時(shí)各種神經(jīng)退行性疾病的致病蛋白還可以通過(guò)外泌體釋放到細(xì)胞外并傳遞到其他細(xì)胞，與病情發(fā)展密切相關(guān)。病細(xì)胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關(guān)的分子，構(gòu)建適合病細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，促進(jìn)病細(xì)胞的發(fā)展。另外，病細(xì)胞來(lái)源的外泌體上粘著分子的表達(dá)形式?jīng)Q定著癥狀向身體部位的轉(zhuǎn)移途徑。近，有報(bào)告指出脂肪細(xì)胞釋放的外泌體對(duì)肝臟的遺傳基因表達(dá)有控制作用。許多病毒利用外泌體的產(chǎn)生路徑傳播細(xì)胞，受病毒傳播的細(xì)菌和寄生蟲(chóng)通過(guò)外泌體控制其他受細(xì)胞傳播的細(xì)菌、寄生蟲(chóng)的活動(dòng)。海洋生物外泌體iTRAQ外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型、目標(biāo)組織的特點(diǎn)等進(jìn)行針對(duì)性的調(diào)整。

外泌體作為細(xì)胞外囊泡的一個(gè)亞群,直徑集中于30~150nm。目前,基于粒徑大小分離外泌體的方法有超濾法、尺寸排除色譜法、靜水過(guò)濾透析法和非對(duì)稱場(chǎng)流分離法等。超濾法利用不同孔徑的濾膜,對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離以獲得外泌體,一般分為壓力超濾和離心超濾。其中離心超濾效果更好,不jin能減輕力對(duì)外泌體的破壞,而且可通過(guò)增大離心力和延長(zhǎng)離心時(shí)間提高外泌體產(chǎn)物濃度。但離心力過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)均有可能導(dǎo)致超濾膜或外泌體破裂。此外,超濾法可以和切向流過(guò)濾法、微控流法、超速離心法或凝膠過(guò)濾色譜法等方法結(jié)合進(jìn)一步提高分離效率。

通過(guò)改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細(xì)胞培養(yǎng)液中沉淀出來(lái)。常見(jiàn)的方法是使用聚乙二醇或凝集素來(lái)沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過(guò)“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力,從而迫使其脫離溶液,進(jìn)而在低速離心條件下發(fā)生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結(jié)合蛋白,可通過(guò)與外泌體質(zhì)膜糖蛋白上的糖鏈結(jié)合來(lái)改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚(yú)精蛋白、醋酸鈉、有機(jī)溶劑沉淀等方法進(jìn)行沉淀分離。外泌體被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子，具有重要的臨床診斷和治理意義。

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進(jìn)入受體細(xì)胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進(jìn)病毒感ran等功能。據(jù)估計(jì)，單個(gè)外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細(xì)胞來(lái)源的外泌體中既包含與細(xì)胞形成、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的共有成分，也包含與來(lái)源細(xì)胞的生物功能相關(guān)的特異分子。如B淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞來(lái)源的外泌體含有大量的主要組織相容性復(fù)合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T細(xì)胞來(lái)源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì)，而ai細(xì)胞來(lái)源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、參與生理病理過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。外泌體是一種由活細(xì)胞分泌的，直徑約為40～160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。海洋生物外泌體iTRAQ

必須慎重分析得到的是否是外泌體。海洋生物外泌體iTRAQ

細(xì)胞分泌外泌體的過(guò)程一般分為三個(gè)階段:(1)質(zhì)膜內(nèi)陷,形成早期內(nèi)吞小泡;(2)內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟,形成多囊泡體;(3)多囊泡體與質(zhì)膜融合,并釋放出囊泡內(nèi)容物,形成外泌體。外泌體具有獨(dú)特的理化性質(zhì),其密度為1.13~1.19g/mL,由平均厚度小于5nm的雙層脂膜所包裹,具有典型杯狀形態(tài),呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈,其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成,另有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的部分特殊脂類。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子,其中主要為蛋白質(zhì),且大部分蛋白為所有來(lái)源外泌體所共有,只有小部分與其來(lái)源有關(guān),為其分泌細(xì)胞的特有蛋白,能夠反映分泌細(xì)胞的類型和生理病理狀態(tài)。除此之外,外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸,并將其運(yùn)輸?shù)桨屑?xì)胞,發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。海洋生物外泌體iTRAQ