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蘇州國產數字PCR原理

來源: 發布時間:2023年05月01日

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數字PCR具備以下優勢:●靈敏度可達到單個核酸分子:檢測限低至0.001%,主要系為數字PCR可以實現靶標DNA/RNA的生物濃縮;●無需標準曲線活參照基因進行對比來測定核算量,可對靶分子起始量進行***定量,直接獨處DNA分子 的個數;●適合環境復雜樣品的檢測:終點PCR檢測,不依賴Ct值,不依賴擴增效率,能克服PCR 劑的影響,避免樣品間的交叉 問題,適合各類復雜環境中的樣本進行 定量,如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等;FAM、VIC雙通道熒光檢測。蘇州國產數字PCR原理

無創產前檢查鐮狀細胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴重的危害,可以導致高達5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細有效的無創產前診斷是預防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術檢測孕婦胎兒 游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結果顯示,dPCR技術能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態。當cff-DNA濃度大于7%時,可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當厲害了。蘇州國產數字PCR原理不依賴Ct值,無需標準曲線。

基因檢測**前沿的兩種方法是:高通量測序(NGS)和數字PCR(dPCR)。高通量測序技術又稱“下一代”測序技術,可以一次對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定,功能強大,但是實驗操作較復雜,數據分析難度較大,檢測周期長,成本較高。數字PCR技術是目前**精細**靈敏的基因檢測技術,借助微液滴或微腔室,通過單個模板分子的PCR擴增,可實現不依賴于標準曲線和參照樣本的***定量。與NGS相比,數字PCR靈敏度高、檢測速度快、操作簡便、結果易讀、成本低廉等優勢使其更適合臨床檢測,成為精細醫療實現平民化、大眾化的比較好選擇。此外,數字PCR還在基因表達差異研究、拷貝數變異(CNV)研究、低豐度DNA模板分子的精確定量、甲基化含量鑒定、二代測序輔助建庫、CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證、轉基因成分的檢測、移植排異監控、腸道菌群分析以及***基因組檢測等眾多領域中有著優異的應用。

微滴式數字PCR系統在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。與傳統PCR相比所具有的優勢不依賴Ct值或內參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數目。微滴技術讓數字PCR更低成本,且更實用。動物源性的檢測分析。

研究方向無創產前篩查無創傷的產前診斷,如21號染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關遺傳疾病)。目前標本來源主要為血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準確性。而QX200檢測系統獨特的微滴化技術完全可以作為二代測序法的補充來進行的無創傷產前診斷,從而提高工作效率及節約成本。轉基 因食品或成分的檢測目前在確定轉基因作物或成分的含量時采取定量PCR的標準曲線法,這種方法需要依賴于已知濃度的標準品(CertifiedReferenceMaterialsCalibrants,CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標準物質的定標工作。MicroDrop?數字PCR平臺是由永諾生物自主研發并已投入生產的微滴式數字PCR檢測系統。蘇州國產數字PCR原理

關于病原菌的檢測鑒定。蘇州國產數字PCR原理

數字PCR也叫DigitalPCR(dPCR),是近幾年發展起來的一種核酸定量分析技術。相較于傳統熒光定量PCR來說,數字PCR對結果的判定不依賴于擴增曲線循環Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數,能夠對起始樣本核酸分子***定量。數字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統計并計算。相對而言,傳統PCR或qPCR反應都是發生于同一體系當中,這也是數字PCR與其比較大的區別。蘇州國產數字PCR原理

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