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上海JUE對定量數字PCR

來源: 發布時間:2022年11月28日

研究方向基因表達差異研究檢測時完全不依賴傳統的Ct值即可實現真正意義上的***定量,從而提供了比實時熒光定量PCR更精確的基因差異表達研究,尤其對于那些靶基因表達差異微小的情況:microRNA、lncRNAs等的表達分析、等位基因的不平衡表達、單細胞基因表達分析、Exosome內核酸分子定量分析等。拷貝數變異(CNV)研究微滴化的樣品處理及檢測,這種擺脫Ct值的計算方法而直接獲取目標基因的***拷貝數,為拷貝數變異的研究提供了***的檢測精度。是其他諸如二代測序、芯片雜交等平臺無法達到的,因此采用數字PCR能夠有效對NGS、aCGH的實驗結果進行驗證,并具有成本低、通量高的特點。雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法。上海JUE對定量數字PCR

數字PCR(dPCR)是近年來引起重視并迅速發展起來的一種突破性的核酸定量分析技術。該技術先將核酸模板進行稀釋,分配到大量 的反應單元中,使每個反應單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應,擴增結束后對每個反應室的熒光信號進行統計學分析,來定量DNA拷貝數。數字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環閾值(Ct),也無需采用內參基因和標準曲線,準確度高、重現性好,可以實現***定量分析。由于其獨特的技術優勢,已經在臨床診斷、轉基因成分定量、單細胞基因表達分析、環境微生物檢測和下一代測序等研究領域顯示出巨大的優勢和應用前景。上海JUE對定量數字PCR可使用第三方PCR反應液,配備PCR A300(溫度范圍4°C-98°C,擴增模塊溫控精度±0.2°C)。

要了解為什么傳統PCR存在限制,務必要了解PCR反應過程中發生了什么。基本PCR運行可以分為三個階段:指數期每個循環積聚的產物準確加倍(假定**反應效率)。該反應具有高度特異性和精確度。出現指數式擴增,因為所有試劑均新鮮可用,反應的動力學推動反應有利于擴增子加倍。線性期(高變異性)隨著反應繼續,一些試劑因擴增而被消耗。反應開始減緩,并且每個循環的PCR產物不再加倍。平臺期(終點:使用傳統方法進行凝膠檢測)反應停止,不再產生更多產物,并且如果放置時間夠長,PCR產物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應動力學,所以每支試管或每個反應將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內,傳統PCR進行測量,又稱為終點檢測。

無創產前檢查

       鐮狀細胞貧血(sickle cell anemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴重的危害,可以導致高達5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細有效的無創產前診斷是預防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結果顯示,dPCR技術能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態。當cff-DNA濃度大于7%時,可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當厲害了。


具備一鍵式自動化操作。

MicroDrop-100數字PCR系統具有如下優點:

1、JUE對定量,結果判讀不需要依賴標準曲線;

2、突破局限,檢測靈敏度可低至萬分之一;

3、專利設計的具有高精度復雜三維微納防污染結構的微流控芯片,單張可同時處理1-8個樣本;

4、一鍵式自動操作,20uL PCR體系可生成100,000微滴,8個樣本單次微滴生成*需2分鐘;

5、FAM、HEX(VIC)雙熒光通道,半導體激光器做為激發光源相比LED光源,穩定性高,功率穩定不影響檢測靈敏度,單色性能優異降低對檢測特異性的影響,且方向性好;

6、檢測器為2個光電倍增管,靈敏度及增益優于MPCC或CCD,普通的硅光子計數器,增益為10^5,光電倍增管增益可以達到10^9;

7、**知識產權的軟件系統可直接計算拷貝數、拷貝數濃度,CNV 值,突變豐度;閾值線可自動或手動完成,每個樣本可單獨設定閾值線;輸出數據圖標、直方圖、一維圖、二維圖、濃度圖、95%置信度不確定性區間等;軟件可自動識別復雜微滴分簇四簇;軟件具備數據質控功能,支持陽性微滴數、陰性微滴數、總微滴數統計及這些指標的任意組合;單個樣本100,000微滴的反應體系以及高靈敏度的檢測系統,配以獨特的軟件系統,可以實現高達20重的PCR分析;

8、單次檢測通量96個樣本,操作靈活; 準確度不完全依賴于擴增效率。上海JUE對定量數字PCR

不依賴Ct值,無需標準曲線。上海JUE對定量數字PCR

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數字PCR具備以下優勢:·能夠有效區分濃度差異微小的樣品:更好的準確度、精密度和重復性,可以用于精確測定靶基因的相對表達,基因拷貝數變異分析等。·數字PCR可開發針對不同**、不同樣本以及不同的樣本環境提供檢測解決方案,該技術的應用范圍廣,尤其在液體活檢領域,已開發針對肺*、乳腺*、腸*、胃*等上百個位點檢測試劑盒,可精細指導臨床***的診斷,以便患者在后續得到更及時并且適當的***方案提供。上海JUE對定量數字PCR

浚和(上海)儀器科技有限公司匯集了大量的優秀人才,集企業奇思,創經濟奇跡,一群有夢想有朝氣的團隊不斷在前進的道路上開創新天地,繪畫新藍圖,在上海市等地區的儀器儀表中始終保持良好的信譽,信奉著“爭取每一個客戶不容易,失去每一個用戶很簡單”的理念,市場是企業的方向,質量是企業的生命,在公司有效方針的領導下,全體上下,團結一致,共同進退,**協力把各方面工作做得更好,努力開創工作的新局面,公司的新高度,未來浚和儀器供應和您一起奔向更美好的未來,即使現在有一點小小的成績,也不足以驕傲,過去的種種都已成為昨日我們只有總結經驗,才能繼續上路,讓我們一起點燃新的希望,放飛新的夢想!

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