個體化診療通過檢測T790M位點突變情況,可以更好地評估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技 術展現出了 的檢測精度,此外,dPCR***定量的優勢也能充分發揮出來了,可以監控突變含量變化,做到及早發現耐藥。2.)基因表達分析伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細胞白血病(CML)患者延長生存期,但是臨床上發現,伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉錄產物表達量有很大的關系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉錄產物進行測定,結果檢測下限可以達到0.001%,顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優勢永諾生物MicroDrop-100微滴式數字PCR儀超越行業的10萬個微滴數,保證泊松分布所需要的充分的樣本量。無錫國產數字PCR正規代理
定量PCR和數字PCR的特點:5.目前定量PCR已經能實現高通量樣品條件下的自動化操作。6.數字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對標準曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數,提高了實驗結果在批內和批間的穩定性,甚至能用來對標準品進行定標。7.基于***定量的方式,數字PCR結果的高重復性和高精度可實現微小差異的基因表達分析,如等位基因的不平衡表達、單細胞基因表達分析、microRNA表達分析等等。所謂“微小差異”的標準一般而言是指表達水平的差異在2倍以內。8.同等條件下,數字PCR在靈敏度方面擁有優勢,使得該技術已成為**的液態活檢、病原微生物檢測、轉基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術。無錫國產數字PCR正規代理雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法。
MicroDrop-100數字PCR系統具有如下優點:1、JUE對定量,結果判讀不需要依賴標準曲線;2、突破局限,檢測靈敏度可低至萬分之一;3、專利設計的具有高精度復雜三維微納防污染結構的微流控芯片,單張可同時處理1-8個樣本;4、一鍵式自動操作,20uLPCR體系可生成100,000微滴,8個樣本單次微滴生成 需2分鐘;5、FAM、HEX(VIC)雙熒光通道,半導體激光器做為激發光 源相比LED光源,穩定性高,功率穩定不影響檢測靈敏度,單色性能優異降低對檢測特異性的影響,且方向性好;6、檢測器為2個光電倍增管,靈敏度及增益優于MPCC或CCD,普通的硅光子計數器,增益為10^5,光電倍增管增益可以達到10^9;7、 知識產權的軟件系統可直接計算拷貝數、拷貝數濃度,CNV值,突變豐度;閾值線可自動或手動完成,每個樣本可單獨設定閾值線;輸出數據圖標、直方圖、一維圖、二維圖、濃度圖、95%置信度不確定性區間等;軟件可自動識別復雜微滴分簇四簇;軟件具備數據質控功能,支持陽性微滴數、陰性微滴數、總微滴數統計及這些指標的任意組合;單個樣本100,000微滴的反應體系以及高靈敏度的檢測系統,配以獨特的軟件系統,可以實現高達20重的PCR分析;8、單次檢測通量96個樣本,操作靈活;
目前數字PCR技術在臨床領域已經有著非常***且***地應用,例如在病原微生物檢測中的應用:HBV檢測、HIV檢測、甲型流感病毒檢測等;在產前診斷中的應用:13/18/21號染色體三倍體檢測、遺傳性耳聾檢測、地中海貧血檢測及優生五項的病毒檢測等;在**靶向***相關基因檢 測中的應用:肺*EGFR基因突變、ALK基因融合檢測、結直腸*KRAS、BRAF基因突變檢測、乳腺*HER2基因擴增檢測、神經膠質瘤IDH基因突變檢測等。以**靶向***相關基因檢測為例,在**形成的超早期,會出現**細胞的壞死和凋亡,這些凋亡或壞死的**細胞會釋放其DNA進入外周血,因此通過分析循環血液中是否含有**特異的游離DNA就可以達到**早期篩查的目的。然而此時DNA含量極低,對檢測的靈敏度和精確性要求極高,目前只有數字PCR技術可以檢測出來。另外進行個體化***時,需要對基因組樣本進行分析,此時利用數字PCR技術也能**提高結果的可信性,進而建立合理***方案。線性范圍達到6個數量級,靈敏度低至萬分之一。
數字PCR的應用檢驗檢疫食品安全?轉基因食品檢測(國標)?病原菌鑒定?動物源性檢測分析科研?基因表達差異監測?CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證?甲基化含量鑒定?單細胞研究:測序、PCR臨床?**液體活檢:早篩、用藥、監測、復發?無創產前篩查:低成本、快速?***性疾病:HBV、HIV定量據悉,MiniDrop?**團隊由微流控、光學、機電學、化學、臨床醫學、分子生物學等多學科交叉領域的**組成,依托精密儀器研發、生物納米材料與分子生物學等平臺,以微滴式數字PCR儀為**,打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創新產品,致力于解決**、***領域的精細診斷。數字PCR技術是公認的液體活檢領域靈敏度比較好的檢測方法。無錫國產數字PCR正規代理
理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應用。無錫國產數字PCR正規代理
微滴式數字PCR系統在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。與傳統PCR相比所具有的優勢不依賴Ct值或內參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數目。微滴技術讓數字PCR更低成本,且更實用。無錫國產數字PCR正規代理
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