RNA提取關鍵點病菌RNA在提取后也仍然具有傳染性，在提取時，實驗人員需要佩戴口罩和手套等各種防護裝備，以防實驗室污染。而有種「自動滅活」的方法，在更加便利的同時，也能更好的保護實驗人員的安全。許多樣品中含有高水平的RNase，這種酶也會加速RNA的降解。為了使這種酶對降解的影響較小化，較好在采集時就穩定好樣本中的RNA。這種情況下，可以在裂解緩沖液中立即進行溶解。比如可以通過TRIzol?、RNA裂解緩沖液等使RNase失活，然后再處理樣本。另外，再采集樣本之后馬上加入DNA/RNAShield，可以快速降解掉RNase等蛋白物質。當然，DNA/RNAShield也會保證取樣時微生物基因多樣性不會發生改變。拭子RNA提取試劑的選擇？洗脫液洗脫能力好，核酸的提取得率就高。杭州南昌RNA提取試劑

RNA的提取：眾所周知，Trizol是一種RNA提取試劑，內含異硫氰酸胍和酚等物質，能迅速破碎細胞和溶解細胞中的其他成分，壓制細胞釋放出核酸酶，維持細胞中RNA的穩定性，我們可以在反應物中加入Trizol后搖勻，在加入氯仿離心，這樣的話我們的RNA就進入了水相中，再用異丙醇沉淀水相中的RNA，即可達到提取總RNA的目的了。首先我們需要稱取一定量的預處理好的廢酵母配10%左右的酵母溶液,在一定溫度下,加入一定濃度的氯化鈉,之后加入NaOH溶液調節反應的pH,攪拌抽提一定時間后,離心分離上清液,調節pH至等電點,經酒精沉淀獲得核糖核酸,用水定容至100mL取1m適當稀釋,調pH7.0,這樣的話RNA就出現了，分別測定吸光值A260和A280并計算A260/A280，就可以測定RNA的提取率了。當然啦，我們還可以進行深入研究，如測定Nacl的濃度，PH的大小，以及抽提時間對RNA提取率的影響啦。杭州南昌RNA提取試劑常用RNA提取方法有：1TRIzol法；2TRIzol+過柱法；3CTAB+過柱法；4試劑盒法。

RNA提取注意事項：1、組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復凍融。2、提取時組織要充分研磨，組織量不宜過少，更不宜過多。3、加入裂解液后應給予充分的孵育時間，使樣本充分裂解。4、在用Trizol法提取時，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸”，千萬不能提取到中間層，否則會導致嚴重的基因組DNA污染。5、洗滌時洗滌液應充分浸潤到管壁的四周，確保洗滌徹底。6、柱式提取法，洗滌完后除了對柱子進行空離后，還應當將吸附柱置于超凈臺內吹風5~10min，使有機溶劑充分揮發干。7、柱式法較后洗脫時候，當加入DEPC水后還應孵育3~5min，或者提前將DEPC水加熱至60℃，可提高洗脫得率。傳統的Trizol裂解異丙醇沉淀法較后RNA是用DEPC水溶解沉淀，則應當給予適當溶解時間，并用泵頭不斷吹吸離心管底部。

RNA組成結構：RNA和DNA一樣，也是由各種核苷酸通過3′，5′-磷酸二酯鍵連接構成的多核苷酸鏈，但與DNA有一系列差異。1.在化學組成方面，RNA含核糖而不含脫氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是，每個tNA分子含有一個胸腺嘧啶，這是在RNA鏈合成后由尿嘧啶甲基化生的，此外，前面已提到，少數DNA含有少量核糖，但這些個別的例外并不能以此否定兩類核酸組成上的差異。2.RNA一級結構的概念雖與DNA相同.但其基本結構單位是核糖核苷酸而不是脫氧核糖核苷酸。此外，部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列，而且RNA一級結構中沒有DNA那樣復雜的順序組織。3.絕大多數RNA為單鏈分子，單鏈可自身折迭形成發夾（hairpin）樣結構而有局部雙螺旋結構的特征，這是各種RAN空間結構的共同特征。RNA局部雙螺旋結構中堿基互補配對規律是A對U和G對C。由于RNA分子內部不能較全形成堿基配對，故其堿基克分子比A不等于U，G不等于C，不存在DNA堿基比例的Chargaff規律。RNase主要來自樣品的細胞。

細胞RNA提取的方法：異丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以見到側壁沉淀，輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀，幫助分離剩余的有機試劑（剩余有機試劑過多會影響OD值和PCR反應），輕彈沉淀，使其浮在酒精，靜置1-2min，讓酒精充分接觸沉淀，充分溶解有機試劑，然后4度離心5min。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機中瞬時離心，棄掉管壁殘余液體。然后將EP管置于超凈臺中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過于干燥，否則很難溶解。加入50ulDEPC處理水，震蕩充分溶解沉淀。測量RNA濃度。將RNA保存于-80度。拭子RNA提取試劑的選擇？對離心柱法而言，拭子核酸得率的高低。杭州南昌RNA提取試劑

在實際RNA提取中，有幾個提取原則：保證RNA一級結構的完整性。杭州南昌RNA提取試劑

總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍普遍，可以從動物組織、植物材料、各種微生物及培養細胞等樣品中提取總RNA。該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液會分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機相，RNA分布在上清層中。收集上清層后，經異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學常規實驗，如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等。杭州南昌RNA提取試劑