外泌體的提取方法學規范、統一定量及鑒定等。關于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,費事費力,而且步驟多導致實驗中容易污染,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩定。而且對于抽提細胞上清來說,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,無論是過濾還是后續的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點,總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,造成濃縮效率低,濃縮管重復利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,造成損失及較后的數據有誤差,對于后續實驗也有影響超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不高的問題。天津正規外泌體提取試劑哪家好
外泌體的提取的方式:1、免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。2、PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。天津正規外泌體提取試劑哪家好用于外泌體提取的體液收集注意事項:注意抗凝劑的選擇。
外泌體在肺病進程中的作用:肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進一些病癥的生長。據相關報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調節基質細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進一些病癥血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過啟動脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外,有研究發現,外泌體中的內容物可以觸發上皮-間質轉化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,促使人正常支氣管上皮細胞出現EMT,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現增殖,遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。
由于這些核酸被囊膜包裹而被保護,穩定性高,不易降解,是一種用于一些病癥診斷和預后監測的非常理想的新型生物標記物一些疾病的早期診斷、用藥監控、預后判斷。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深,外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創診斷、治病和監測;如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵。外泌體(Exosome)是從體液(尿液、血液、唾液、腹水、胸腹水等)和細胞液中快速提取的,其是活細胞分泌到胞外的囊泡樣小體,含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA、以及miRNA),在體內細胞間物質和信號轉導中起到重要作用。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規化應用的關鍵。
外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心,這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創診斷。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深。天津正規外泌體提取試劑哪家好
外泌體提?。好庖叻蛛x外泌體的原理大多是通過抗體包被的微球,特異性結合外泌體。天津正規外泌體提取試劑哪家好
外泌體與免疫系統:不同的細胞來源的外泌體,包括免疫細胞(B細胞和樹突狀細胞)、病細胞、上皮細胞和間充質細胞,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統和適應性免疫系統中受體細胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細胞可直接或間接地受到外泌體的影響,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾病:外泌體可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發生的發展過程中起作用。體外培養心血管疾病的細胞收集的外泌體與疾病相關的代謝適應有關;體外培養的間充質干細胞和胚胎干細胞的外泌體具有保護心血管的作用。這些發現表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA,蛋白等物質改變受體細胞的代謝狀態。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創診斷。天津正規外泌體提取試劑哪家好
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