可以。為了能夠高效提取細胞培養上清中的外泌體,磁珠可重復使用5次(同一樣品)。試劑盒里的緩沖液含5次提取需要的量。1mL體積以上細胞上清樣本建議進行濃縮后再回收,提取時可進行反復抽提,提高提取效率。用血液樣品進行實驗時,需要根據磁珠狀況來判斷是否能重復利用;若磁珠發生聚集,利用渦旋儀也無法使磁珠分散,不建議繼續使用。詳情參考操作說明書。太好了,這樣實驗成本瞬間就降下來了,那樣品純化所需的比較低量是?老師:使用旋轉器的需要500μL以上,使用離心管混合器的需要100μL。樣品量更少的情況下加TBS到所需比較低量后再使用ExosomeCapture固定化磁珠。同學:電鏡分析需要外泌體的量是多少?外泌體提取:超離法因操作簡單,獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎。濟南正規外泌體提取試劑廠家推薦
外泌體因諾貝爾醫學獎而被眾人知曉,也因其作為生命信息傳遞者,在體液中普遍存在及易獲得性等特點被譽為液體活檢"新貴",成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點,尤其是在一些病癥研究領域[。外泌體作為細胞間通信載體的作用現在已被普遍接受。外泌體包含胞質環境中富含的DNA,RNA,蛋白質和其它分析物,研究表明,外泌體中的運轉RNA和蛋白質與一些病癥的生長密切相關,有望作為診斷標志物。研究發現Vps4A是一個外泌體的重要調控因子,與肝病的發生有著密切的關系,Vps4A基因的表達下調肝病的發生及轉移相關。通過microRNA高通量測序發現Vps4A基因能導致外泌體分泌肝病相關的重要microRNA,與肝病的發生密切相關。濟南正規外泌體提取試劑廠家推薦由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質。
外泌體相關蛋白質與肺病的診斷:近年來,高通量質譜分析被普遍地應用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,這為我們揭示了更多具有生物標志物價值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術研究了431例肺病患者和150例對照者血漿外泌體中的蛋白表達情況,發現CD151、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達不光能區分一些病癥與正常組織,同時也能區分各種肺病的組織亞型。此外,聯合應用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達到0.74。Clark等采用納升液聯用技術(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來自正常支氣管上皮細胞系和兩個攜帶NSCLC細胞系的外泌體的蛋白表達譜,從中篩選出如細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子、溶酶體膜糖蛋白2等多種存在顯著性差異表達的蛋白,同時檢測分析這些蛋白有助于提高NSCLC診斷的敏感性和特異性。由于國內有關外泌體提取試劑的缺乏,我國對外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進口提取試劑盒。
外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,直徑約為30-200nm,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態、雙層膜結構,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養基等生物體液中。包括瘤細胞在內幾乎所有類型的細胞(免疫細胞、神經細胞、干細胞),都可以產生并釋放exosome。Exosome內含有與細胞來源相關的蛋白質rRNA和microRNA,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,也可運輸蛋白質、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至細胞器進入受體細胞,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎癥反應、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發揮關鍵作用,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標記物,也能作為靶向藥物的載體進行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,它可以通過外泌體從一個地方轉運到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化,可以發現外泌體中miRNA特異性功能。外泌體的提取分離:試劑盒提取。
外泌體的提取、分離方法:免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法,主要用于生物大分子的分離、純化。將其應用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結合,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,但是產量低。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白,結果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix、CD9、CD63),同時,ELISA和PCR結果也證明了該方法的可行性。形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統,影響細胞的生理狀態并與多種疾病的發生與進程密切相關。濟南正規外泌體提取試劑廠家推薦
獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時。濟南正規外泌體提取試劑廠家推薦
有研究發現,NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%,而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,因而認為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數據庫分析發現153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質,進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導途徑以促進一些病癥的發生的發展,因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學標記物。外泌體相關蛋白質與肺病的診斷:近年來眾多文獻報道,肺病細胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質并促進肺病的發生的發展,是早期診斷肺病的有效途徑。濟南正規外泌體提取試劑廠家推薦