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來源: 發布時間:2024年10月19日

外泌體的提取、分離方法:開發高效、快速、穩定,并且保持外泌體結構和生物功能完整性的方法,是目前外泌體應用于臨床的基礎和前提。從細胞上清和體液中提取分離外泌體的方法很多,但是外泌體的純度和產量卻和分離方法息息相關。通常分離步驟少、產率高,但是純度會受到影響。鑒于每種分離方法都有其優缺點,實驗可以根據樣本來源、下游實驗目的等,選擇合適的外泌體分離方法。2015年,國際囊泡組織(InternationSocietyforExtracelluarVesicles,ISEV)指出,簡單依靠一種分離方法得到的外泌體的純度和產量都難滿足實驗的需求。因此,推薦聯合使用各種方法,從而得到高純度和高產量的外泌體。外泌體的提取分離:PEG-base沉淀法。合肥正規外泌體提取試劑哪家便宜

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1996年GRaposo等發現類似于B淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體(antigenpresentingvesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應CD4+細胞的抗一些病癥反應。2007年HValadi等進一步發現細胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質。隨著有關外泌體研究越來越多,研究者發現它普遍參與了機體免疫應答、抗原呈遞、細胞分化、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中。目前的主流觀點認為,外泌體的產生過程為:細胞膜內陷,形成內體(endosome),再形成多泡體(multivesicularbodies,MVB),較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體較早見于1981年,EGTrams等在體外培養的綿羊紅細胞上清液中發現了有膜結構的小囊泡,并命名為exosome。對于外泌體的作用,當時推測為細胞排泄廢物的一種方式。廈門正規外泌體提取試劑銷售廠家人尿液來源細胞的外泌體的獲取方法,是首先分離培養人尿液來源細胞并收集培養基。

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外泌體的提取、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法;尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,較初是根據蛋白質分子大小分離蛋白質的色譜技術。該方法的主要優點是不需要很大的離心力,從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,結果顯示,后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規模的生產和臨床應用提供了可能。超濾也是根據外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程,通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質。不過連續的超濾可以分離出外泌體,和超高速離心相比,超濾不需要特殊的設備就可以較短時間內分離出外泌體。但是,超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產量,并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA外泌體提取:可分離到大小相近的囊泡顆粒。

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1983年,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。用于外泌體提取的體液收集注意事項:避免劇烈搖晃。杭州外泌體提取試劑服務電話

外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。合肥正規外泌體提取試劑哪家便宜

外泌體在肺病治病中的作用:有研究發現,使用外泌體運載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細胞對PTX的吸收,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細胞毒性,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發展。Aqil等在進行裸鼠實驗時發現,加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強的抗一些病癥功效,且在小鼠中未發現明顯全身性或系統性毒性,由此可以證明,外泌體制劑可以有效增強CEL功效并降低與劑量有關的毒性。到目前為止,外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制,有效的外泌體藥物遞送平臺的搭建以及外泌體相關的潛在治病靶點的探索。已有的研究表明外泌體在肺病治病領域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病治病領域早日得到突破,造福更多的患者。合肥正規外泌體提取試劑哪家便宜

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