總RNA提取試劑,適用于動植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提,可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交,純化mRNA,體外翻譯,RNase保護(hù)實(shí)驗(yàn),RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。該試劑可用于100次總RNA提取(10平方厘米細(xì)胞或100mg組織)。總RNA提取試劑注意事項(xiàng):1,RNA提取過程中所用器皿、離心管、吸頭等應(yīng)保證無污染無RNA酶。操作中應(yīng)小心,防止外源性RNA酶污染樣品導(dǎo)致RNA樣品降解。2,試劑中含有酚等有害物質(zhì),注意個人防護(hù)。自備新開封或?qū)iT氯仿,異丙醇,75%乙醇,DEPC處理水。植物花總RNA提取試劑盒:效去除植物花組織中的多糖、多酚類等雜質(zhì)。南京正規(guī)RNA提取試劑報價
拭子RNA提取試劑的選擇?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,也可通過增加樣本量來實(shí)現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,應(yīng)及時考慮更換試劑盒。目前國內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求。蘇州RNA提取試劑廠家供應(yīng)可以用260nm波長分光測定RNA濃度,OD值為1相當(dāng)于大約40μg/ml的單鏈RNA。
拭子RNA提取試劑的選擇?操作簡便性。操作簡便性也是拭子RNA提取試劑選擇的一個重要因素。操作過于復(fù)雜,不光費(fèi)時費(fèi)力,還容易導(dǎo)致樣本間的交叉污染,也容易損失樣本。特別是用于臨床檢測或樣本量較多情況下的檢測,操作復(fù)雜如果導(dǎo)致交叉污染會引起誤診,還會影響出檢測報告的時間。因而,選用操作簡便、流暢的提取試劑盒非常重要。就我們曾經(jīng)用過的以上三種提取試劑盒來說,Q公司的拭子RNA提取試劑盒提取過程大約25min,從樣本處理開始需要10個步驟;T公司拭子RNA提取試劑盒整個提取過程需要1個多小時,從樣本開始處理10個步驟;B公司的Biog拭子RNA提取試劑盒提取過程大約20min,從樣本開始處理7個步驟,B公司的拭子RNA提取試劑盒在操作簡便性上具有一定優(yōu)勢,更適合于較多樣本的檢測。據(jù)了解,該產(chǎn)品已通過藥監(jiān)局備案,也更適合臨床樣本的檢測。
miRNA是一類內(nèi)源性的約22個核苷酸的非編碼RNA分子,可參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。在細(xì)胞的分化和發(fā)育,細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和對傳染的應(yīng)答等生物學(xué)過程中,miRNA發(fā)揮了重要作用。成熟的miRNA主要通過翻譯壓制來調(diào)控內(nèi)源性基因的表達(dá)。miRNA的應(yīng)用有miRNA模擬物和壓制劑。miRNA模擬物是化學(xué)合成的雙鏈RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,模擬成熟的內(nèi)源性miRNA分子;miRNA壓制劑是單鏈經(jīng)過修飾的RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,特異性的壓制miRNA的功能。miRNA模擬物和壓制劑可以用于研究單個miRNA錯誤調(diào)節(jié)所造成的生物學(xué)影響,也能用于確定某個miRNA分子的特異性靶標(biāo)基因。同時有研究發(fā)現(xiàn)miR-143可調(diào)控KRAS原病基因,為病癥的醫(yī)治提供了新的靶點(diǎn)和醫(yī)治方法。植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點(diǎn):RNA純度更高,無雜質(zhì)殘留,特別適合于對純度要求很高的下游實(shí)驗(yàn)。
RNA提取注意事項(xiàng):所有實(shí)驗(yàn)所用的泵頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的;整個過程要在無RNase污染的條件下進(jìn)行,通常可以在無菌操作臺中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并用75%的酒精進(jìn)行擦拭殺菌,如有必要也可在實(shí)驗(yàn)前噴灑一些商用的RNase壓制劑;所有相關(guān)溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水(包括75%酒精也需要用無水乙醇與DEPC水配制);溶液的配制使用移液器進(jìn)行操作,切勿使用量筒等中間器皿;研缽、研棒、鑷子、剪刀等用錫箔紙包好后,200℃干熱滅菌4h;實(shí)驗(yàn)過程中一定要戴手套和口罩;異丙醇、氯仿、乙醇等試劑要使用未開封的,或者開封之后直接分裝至小容量離心管的,以避免多次使用的交叉污染;DNA/RNA Shield 也會保證取樣時微生物基因多樣性不會發(fā)生改變。成都正規(guī)RNA提取試劑直銷價
RNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題。南京正規(guī)RNA提取試劑報價
酵母RNA的提取方法:濃鹽法。酵母菌外層是厚達(dá)1.2μm的細(xì)胞壁,其化學(xué)成分是葡聚糖(30-40%)和甘露聚糖(30%),此外,脂類8.5-13.5%,蛋白質(zhì)6-8%,還含有幾丁質(zhì),酵母菌的葡聚糖,分子是為240000道爾頓,是一種分枝聚合物,葡聚糖與甘露糖之間由蛋白質(zhì)維系起來。近10%的甘露聚糖的側(cè)鏈通過磷酸二酯鍵與磷酸邊接,所有這些連接方式都使得酵母提取物首要的也是關(guān)鍵的是如何破壞細(xì)胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多種方法,而用高濃度鹽溶液處理,同時加熱,以改變細(xì)胞的通透性,就可以使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。由于RNA鈉鹽易溶于水,在含鹽的菌體溶液中,RNA有較高的溶解度,這樣,通過控制溫度使蛋白質(zhì)變性沉淀,通過離心將RNA及蛋白質(zhì)和脫核酵母菌體分離,從而達(dá)到提取之目的。其中食鹽起到自溶促進(jìn)劑,以及防腐與脫臭的作用。南京正規(guī)RNA提取試劑報價