細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養液，而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。3、加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度。PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。天津正規無血清細胞凍存液產品介紹

細胞凍存和復蘇的原則：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。細胞凍存液除去蛋白酶，添加適量配置好的凍存細胞培養液.細胞培養的傳代及日常維持過程中，在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦開始原代培養，它的各種生物特性都將逐漸發生變化并隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。珠海正規無血清細胞凍存液廠家細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求。

干細胞無血清凍存液操作事項：使用說明：1.細胞消化和計數，用胰酶對待凍存的細胞進行消化，并對細胞進行計數。2.1000轉/min離心5分鐘（4℃），去掉上清。3.根據細胞計數的情況，加入適量的干細胞無血清凍存液，使細胞密度在1×106左右（或根據自己希望達到的細胞密度）。4.輕輕地重懸細胞（務必重懸均勻）。5.將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標記或者貼上標簽）中，旋緊凍存管蓋。6.將凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。7.第二天將細胞從-80℃轉移到液氮中。注意事項：1.用處于對數生長期的細胞進行凍存。2.控制好胰酶的消化時間，切記消化過度，會影響復蘇效果。3.重懸細胞的過程中，請務必要輕柔，以免損傷細胞，但同時也一定要充分重懸，這樣細胞在復蘇時才不會成團。4.細胞操作請注意無菌。

無血清細胞凍存液對比含血清細胞凍存液的優勢：傳統的細胞凍存液是使用培養基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量的死亡。）無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。

細胞凍存時間和操作步驟：1、首先我們需要凍存培養液，通常細胞凍存液含10%的DMSO，或者是甘油、10-20%的小牛血清；、取對數生長期細胞，并且還需要用PBS進行清洗，需要注意在這里要丟棄掉舊的細胞凍存液；3.去除PBS，加入適量的胰蛋白酶，以覆蓋住培養皿表面為宜，然后把單層生長的細胞消化掉；然后離心1000rpm5min時間；4、去除胰蛋白酶，加入凍存培養液，輕輕吹打使細胞的分布變得均勻，調節細胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml，需要注意這是較佳的細胞密度；5、將細胞裝入凍存管之中，每管的含量應該保持在1～1.5ml之間。在凍存管上標明細名稱、時間、操作者；6、較后要說的就是細胞凍存的時間了，對于標準的凍存程序來說，需要進行梯度降溫，降溫速率-1～-2℃/min，一旦溫度達到-25℃以下時，那么就可增至-5℃～-10℃/min；等到-100℃的時候，可迅速的放入到液氮之中。無血清凍存液用途：為確保產品質量，請避免反復凍融相關產品。南昌正規無血清細胞凍存液廠家供應

無血清凍存液注意事項：凍存液加入細胞后，請盡快放入-80C冰箱凍存。天津正規無血清細胞凍存液產品介紹

細胞凍存注意事項：1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致炸列。2.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜（DMSO）對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在1-2min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜（DMSO）選擇進口產品。3.離心前須加入少量培養液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。天津正規無血清細胞凍存液產品介紹