外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發的外泌體快速提取試劑盒,組分經過優化處理,適用于細胞培養上清液、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾,進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質。珠海外泌體提取試劑哪里買
外泌體(exosome),特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。現已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞、樹突狀細胞、瘤細胞、間充質干細胞等。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用。同時,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發生分為三類,包括外泌體、微泡和凋亡小體。溫州正規外泌體提取試劑廠家供應外泌體提取:小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強地滯留,更慢地被洗脫出。
CD47是信號調節蛋白α(SIRPα,也稱為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結合能夠發出“不要吃我”的信號,從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用,但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性。研究人員發現,CD47和病基因KRAS驅動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環系統的清理,并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以,外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。
外泌體的提取、分離方法:梯度密度離心法。研究發現,外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結合,原理是先除去非囊泡物質,再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足,污染物質可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個密度范圍又比較寬。外泌體的提取方法:色譜法。
作為一種分子通斷開關的KRAS發生突變時會處于“開啟”狀態。在80%~95%的胰腺導管腺病(PDAC)當中,這個基因發生突變,這也是這種一些疾病中較為常見的突變。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子,并且比他們的合成對應物脂質體(liposome)更加高效。脂質體不具有外泌體表現出的天然復雜性和優勢。德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學助理教授ValerieLeBleu博士說,“我們的研究提示著與脂質體相比,外泌體表現出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優異能力。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環單核細胞的吞噬作用。”由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質。石家莊外泌體提取試劑哪里買
無法實現臨床的常規化應用。珠海外泌體提取試劑哪里買
外泌體相關蛋白質與肺病的診斷:近年來,高通量質譜分析被普遍地應用于篩選NSCLC外泌體蛋白的研究,這為我們揭示了更多具有生物標志物價值的分子。Birgitte等采用微陣列芯片技術研究了431例肺病患者和150例對照者血漿外泌體中的蛋白表達情況,發現CD151、CD171和TSPAN8這三種蛋白表達不光能區分一些病癥與正常組織,同時也能區分各種肺病的組織亞型。此外,聯合應用這三種蛋白診斷NSCLC的AUC達到0.74。Clark等采用納升液聯用技術(nano-ESI-LC-MS/MS)分析了來自正常支氣管上皮細胞系和兩個攜帶NSCLC細胞系的外泌體的蛋白表達譜,從中篩選出如細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子、溶酶體膜糖蛋白2等多種存在顯著性差異表達的蛋白,同時檢測分析這些蛋白有助于提高NSCLC診斷的敏感性和特異性。由于國內有關外泌體提取試劑的缺乏,我國對外泌體的研究還基本依賴于過程繁瑣的超速離心和進口提取試劑盒。珠海外泌體提取試劑哪里買