細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,起到了細(xì)胞保種的作用。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,利用凍存技術(shù)可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。目前現(xiàn)有技術(shù)中,細(xì)胞凍存液中的主要成分有10%二甲基亞砜(DMSO)、20%~90%胎牛血清(FBS)、剩余組分為完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)基以及FBS可為細(xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。DMSO是一種滲透性保護(hù)劑,能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn),減少冰晶的形成,從而達(dá)到降低細(xì)胞損傷的保護(hù)效果。但FBS屬于動(dòng)物源性物質(zhì),成分比較復(fù)雜,在臨床應(yīng)用上存在潛在的風(fēng)險(xiǎn),也增加了污染的幾率,并且由于凍存液中含有動(dòng)物血清,會(huì)導(dǎo)致凍存液的成分存在不穩(wěn)定的因素。無血清細(xì)胞凍存液,2-8℃保存即可,無需再進(jìn)行分裝。溫州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液平均價(jià)格
細(xì)胞凍存的操作步驟:1.配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。3.去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來;4.離心1000rpm,5min;5.去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的較終密度為5×106/ml~1×107/ml;6.將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5ml;7.在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;8.凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。珠海無血清細(xì)胞凍存液?jiǎn)蝺r(jià)無需程序降溫,細(xì)胞復(fù)蘇率90%以上。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點(diǎn)降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
細(xì)胞凍存秘籍:1.在倒置相差顯微鏡上每隔幾分鐘檢查酶處理的進(jìn)展情況。一旦細(xì)胞變圓,輕輕敲擊細(xì)胞瓶使其脫離塑料表面。加入5mL含血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基滅活胰酶。可能需要?jiǎng)×业囊埔翰僮鱽硎古囵B(yǎng)容器底部的剩余細(xì)胞脫落,或?qū)⒓?xì)胞團(tuán)塊分解成單細(xì)胞懸浮液。胰酶的去除或失活對(duì)于冷凍細(xì)胞至關(guān)重要。如果游離試劑不能直接滅活,可以通過下一步的離心去除。2.用15ml離心管收集細(xì)胞。取出樣本進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),剩余的細(xì)胞懸液以約100×g離心5分鐘以獲得細(xì)胞沉淀。離心時(shí),用細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。使用臺(tái)盼藍(lán)染液檢查細(xì)胞的活性。無血清細(xì)胞凍存液,為多種保護(hù)劑組合。
所含化學(xué)成分明確,無動(dòng)物源性成分,可一步實(shí)現(xiàn)細(xì)胞凍存并長(zhǎng)期在-80℃冰箱保存,保護(hù)細(xì)胞免受冰晶和溶質(zhì)損傷,適用于大多數(shù)常規(guī)細(xì)胞。LiveCyteTM(LC-1602)是原代細(xì)胞及干細(xì)胞**凍存液,可進(jìn)一步提高原代細(xì)胞和干細(xì)胞凍存效率。產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)1、省去繁瑣的降溫步驟,可直接放置于-80°C冰箱,節(jié)省時(shí)間和精力。2、即用型,無需現(xiàn)配,操作方便,可減少實(shí)驗(yàn)中因操作引起的污染。3、在多種哺乳細(xì)胞系中經(jīng)過性能驗(yàn)證,其復(fù)蘇率和活率達(dá)90%以上。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色:成分明確,無批次差異。長(zhǎng)沙無血清細(xì)胞凍存液廠家直銷
無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):含DMSO、糖類、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液。溫州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液平均價(jià)格
產(chǎn)品簡(jiǎn)介我們經(jīng)過長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)研究與反復(fù)驗(yàn)證,研發(fā)出一系列新型細(xì)胞凍存產(chǎn)品,能有效地提高常規(guī)細(xì)胞、原代細(xì)胞與干細(xì)胞的復(fù)蘇后存活率與活力。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠,使用方便,助力科研工作者擺脫程序繁瑣、操作復(fù)雜、容易污染的傳統(tǒng)凍存方法,專注于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。LiveCyteTM(LC-1601)是即用型細(xì)胞凍存液,所含化學(xué)成分明確,無動(dòng)物源性成分,可一步實(shí)現(xiàn)細(xì)胞凍存并長(zhǎng)期在-80℃冰箱保存,保護(hù)細(xì)胞免受冰晶和溶質(zhì)損傷,適用于大多數(shù)常規(guī)細(xì)胞。LiveCyteTM(LC-1602)是原代細(xì)胞及干細(xì)胞**凍存液,可進(jìn)一步提高原代細(xì)胞和干細(xì)胞凍存效率。溫州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液平均價(jià)格