三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,真空冷凍干燥備用。青島鼠尾膠原生產廠家
以鼠尾膠原為支架的類似物的建立:探尋建立類似物的培養方法。方法:原代培養人皮膚成纖維細胞,制備鼠尾膠原,將鼠尾膠原溶液、濃縮培養基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當的比例下混合后形成凝膠構建類似物。結果:形成的類似物中成纖維細胞生長狀態良好,并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結論:①利用鼠尾膠原可以構建類似物,該模型是進行皮膚部位型培養和制作復合皮的關鍵與基礎;②成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性,它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型。鄭州正規鼠尾膠原直銷廠家鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠3種基質對體外培養角膜上皮細胞增殖的影響。
鼠尾膠原實驗應用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養法培養人鼻腔纖毛上皮細胞,培養7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態和結構,應用高速攝像技術測量纖毛擺動頻率.結果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養模式的成功建立,為今后研究鼻內用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。
生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結合的工藝,保持恒低溫無菌的環境,利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中,進行多次真空冷凍干燥,并經進一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉;較后由滅菌、無菌包裝,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上。本發明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫用材料,所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結構。生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結合的工藝,保持恒低溫無菌的環境。
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:在工業應用方面,鼠尾膠原蛋白用于培養容器等實驗室設備的內部涂層。設備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥。它還可以用來制造一種凝膠,可當作懸浮細胞的培養基。此外,還可以把它當膠水使用。在化妝品行業,鼠尾膠原蛋白可當作沐浴液和肥皂中的凝膠。它還用于生產能減少皺紋和改善皮膚質量的面霜或護膚霜。不過,用于撫紋,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從牛或豬提取。不過,用于撫紋,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從牛或豬提取。4°C沉淀10小時,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。昆明鼠尾膠原廠家供應
涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。青島鼠尾膠原生產廠家
鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養中的應用:在國外的藥理,毒理和皮膚病學的研究領域中已得到的限翩,否則培養成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養層,提高了培養細胞的材料和方法r1]實驗材料:培養液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細胞培養皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養液.用梯度離心收集細胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見文獻c13o(4)培養皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣。青島鼠尾膠原生產廠家