新常態下細胞凍存指南：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍速融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。典型的細胞凍存液是在生長培養基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO。目前在有些實驗室中仍然采用這種自制自配的凍存液，優點是成本低，適合自己的細胞。含血清，細胞污染(細菌、霉菌和支原體等)的風險更高。徐州濟南無血清細胞凍存液

無血清快速細胞凍存液細胞冷凍保存方法：選擇凍存處于對數生長期的細胞有助于提高復蘇細胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細胞或貼壁細胞于試管中。2.按照培養細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當于所需細胞數的細胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4.加入適量的無血清型細胞凍存液于離心管中，使細胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細胞混合液。5.將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。6.直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存。7.若研究者需要液氮保存時，可將完全凍結的凍存管（放入-80℃冰箱后至少一晝夜）移至-196℃液氮罐。徐州濟南無血清細胞凍存液血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異。

細胞凍存及復蘇的基本原則是“慢凍快融”，這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多用二甲基亞砜（DMSO）作為保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性；緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少冰晶對細胞的物理損傷。復蘇細胞采用快速融化的方法可以保證細胞外結晶在很短的時間內融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。血清完全細胞凍存液，通用于各種動物細胞株。特別配方有效提高細胞存活率和活力。不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等污染，確保凍存細胞安全。適合用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。

冷凍速率：冷凍速率是指降溫的速度，直接關系到冷凍效果。冷凍速度不同，細胞內水分向外流動的情況也不相同，不同的冷凍速度既然能使細胞內發生不同的生理變化，也可以對細胞產生不同的損傷。超快速玻璃化冷凍對細胞存活來說是較為理想的冷凍方法。細胞內外呈玻璃化凝固，無冰晶形成或形成很小的冰晶，對細胞膜和細胞器不致造成損傷，細胞也不會在高濃度的溶質中長時間暴露而受損。不同細胞的較適冷凍速率不同。小鼠骨髓干細胞、酵母、人紅細胞的較適冷凍速率分別為1.6℃/min、7℃/min和200℃/min。細胞與細胞之間的較適冷凍速率可在1.6℃～300℃/min，故對一種細胞進行冷凍保存之前，首先需要測定其較適冷凍速率，以保證獲得較高的冷凍存活率。在細胞培養中，細胞凍存是較關鍵環節之一。

細胞凍存：取出凍存管，注明細胞名稱，代數，日期。離心后，以無菌吸管吸棄上清，不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻，根據計數結果，將細胞總數調節成細胞數量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1℃。或者，將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中，然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置，可以先將凍存管置于4℃30min，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經冷凍的細胞轉移到液氮容器中，置于液氮上方的氣相空間中儲存程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養基、血清、DMSO。徐州濟南無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液產品特色：不含動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低。徐州濟南無血清細胞凍存液

細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。在過去的幾十年中，科研工作者將培養基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液，并配合手工使細胞從4℃，-20℃，-80℃到液氮中逐步轉移使其達到“慢凍”的效果。但這種自制的凍存液儲存時間一般比較短，不能滿足時間跨度大的實驗項目的需求。且這樣人力和時間成本大，人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實驗結果帶來了不穩定性。徐州濟南無血清細胞凍存液

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