如果能確保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話,那么有可能是這個目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性(構(gòu)象差異)而影響濃縮效果,建議選用上一分子量級別的超濾管(如原本選用30k,此時可以選擇10k)。 2)如果目的樣本也不在濾過液中,那么: a)蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL? b)用來確定樣本濃度的方法是什么?是否可信? c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是的,具體解決方法請參考上面的關于蛋白沉淀問題的解釋。對于不同的需求我們選擇不同的超濾濃縮管系列。虹口區(qū)默克離心濃縮管聯(lián)系方式
用超濾對分子進行分級 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實際。事實上,膜的規(guī)格描述是基于截留而非通過 的性質(zhì)。一項實驗中,采用 100k NMWL 濾膜,大于 100kDa 的分子截 留率 >90%,但這時比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜, 75kDa 的分子截留率為 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡單和容易。實 踐中,如果要分離兩種大分子,它們之間的分子量差異應該達到 10 倍 以上,或至少膜的 NMWL 規(guī)格在兩種蛋白之間,則可達到比較理想的 分離。如果蛋白溶液較為稀釋,低壓下操作也有助于達到更好的效果。虹口區(qū)默克離心濃縮管聯(lián)系方式超濾濃縮管的系列有很多種。
提供的超濾管是沒有經(jīng)過去內(nèi)***處理的,同時由于內(nèi)***通常以多聚體的形式存在,大小 在10-1000KD之間不等,在超濾的過程中是無法去除的。可在實驗前通過先用0.5M NaOH預清洗,隨后用Milli-Q?水/緩沖液清洗的步驟去除大部分內(nèi)***。關于針對Amicon?,Microcon? , Centricon?嘗試過的內(nèi)***去除方案。 Amicon? Ultra超濾管使用的是再生纖維素膜,這種材質(zhì)是蛋白吸附比較低的超濾膜。但是對于一些疏水性蛋白或非極性蛋白,它們和膜的非特異吸附可能會增強,對于這種情況,可以嘗試在實驗前對超濾管進行封閉處理。也可以嘗試換成Amicon? Ultra 0.5或2來進行實驗,通過減小膜面積來降低非特異性吸附。
這種小管適合在1.5mL離心機中使用,其Ultracel?超濾膜對于蛋白及其它成分都表現(xiàn)出 極低的非特異性結(jié)合,連同醫(yī)藥級O型圈封閉設計,確保更少的樣品丟失,更穩(wěn)定的數(shù)據(jù)結(jié)果。諸多考慮周到的精細設計使Microcon?成為比較好用的樣品制備工具之一。 特點與優(yōu)點: 低吸附膜和反轉(zhuǎn)回收設計,即使是小體積、低濃度樣品得率也能達到95%以上 可以用產(chǎn)品自帶的1.5mL樣品收集管存儲濾過液和濃縮產(chǎn)物 濃縮倍數(shù)可達100X 操作簡便快捷,易于標準化。 Microcon? DNA Fast Flow 超濾管 專門設計用于從含有SDS的溶液中濃縮和回收基因組DNA。管子和膜均為低非特異性吸附的材質(zhì),醫(yī)用級O型圈密封,保證了在洗滌步驟中樣品丟失**少。反轉(zhuǎn)回收設計,即使樣品量很小也能獲得理想的得率,濃縮倍數(shù)可以達到20X。超濾濃縮管的主要優(yōu)勢是什么。
近年來隨著分離純化技術的提高,關于外泌小體的研究成果頗豐;這進一步吸引了越來越多領域的課題將外泌體納入研究對象。研究的前提是方便、高效、標準化地分離純化外泌小體。經(jīng)過近20年的探索,已經(jīng)建立了超速離心法、沉淀法、色譜法、親和純化法等。在大量實踐中大家逐漸認識到根據(jù)下游研究對樣品的要求,以及起始樣品的規(guī)模、數(shù)量,可以選擇不同的外泌體制備策略。因不需要特殊的設備和試劑盒,對操作人員也沒有特別的經(jīng)驗要求,超濾法后來居上,成為實驗室中制備外泌體的通用方法。超濾濃縮管批發(fā)價格是多少呢。虹口區(qū)默克離心濃縮管聯(lián)系方式
超濾濃縮管的系列有很多。虹口區(qū)默克離心濃縮管聯(lián)系方式
首先,Amicon? Ultra超濾管的蛋白比較低起始濃度為25ug/ml。請確保樣本的起始濃度大于這個濃度。其次,如果問題仍然出現(xiàn),請不要丟棄樣本濾過液以便用于分析可能的原因: 1)如果目的樣本在濾過液中,那么請排查: a)是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)? b)使用的離心力是否是在限定范圍內(nèi)?如果使用的是rpm,請換算成相應的g離心力,具體換算方法請垂詢。 c)離心機**近是否有校準過? d)是否***嘗試這個蛋白?虹口區(qū)默克離心濃縮管聯(lián)系方式
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