外泌體的精制磁珠法富集精制外泌體:300μg樣品(相當于300μg總蛋白)用含有5μg anti-CD63抗體的溶液稀釋,與protein A/G磁珠共孵育1hr,漂洗后用0.2M glycine洗脫。如果要先將抗體偶聯在磁珠上(以避免抗體洗脫下來對外泌體的干擾),請參考默克磁珠操作說明書。(Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3))。推薦使用試劑目錄號信息:cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已經建立了基于“微濾+超濾”的外泌體制備操作標準,相較于需要昂貴的設備及繁瑣操作的超速密度梯度離心,用實驗室常見的工具解決外泌體制備的高大上問題,真是惠而不費,不亦樂乎?超濾濃縮管的好處有很多。靜安區離心濃縮管聯系電話
超濾(UF)常用于分離溶液中極其微小的顆粒和不溶分子。雖然分離效果受到包括化學性質、電荷等多種因素影響,這種方法主要還是以分子大小為**基本的考慮。超濾膜截留1-1000kDa(MW)的分子,鹽和水等小分子會透過,因此在大分子樣品處理中得到了應用。膠狀或微粒狀物質也能夠被截留。UF膜既可以用于透過樣品也用于保留樣品的純化。樣品***小于膜孔徑,則經過膜處理可以達到除熱源、澄清和與大分子污染物的分離的效果。如果目的分子遠遠大于膜孔徑,膜處理則可以將小分子污染物去除而目的分子被濃縮。超濾方法相比沉淀法對于樣品更溫和,沒有發生容易導致生物大分子失活的相變,而且在濃縮的同時可以完成對溶質的除鹽。超濾的應用不限于蛋白樣品的操作,也常用于核酸樣品制備,包括分子克隆和質粒純化。DNA和RNA樣品起始濃度低至5ng/mL也可以被高效地在數分鐘內被濃縮,回收率達到99%以上。浦東新區默克2ml超濾濃縮管代理價益啟生物公司主營超濾濃縮管銷售。
抗體標記 適合25-200μg樣品操作 5次低速離心,總耗時~50分鐘 1. 在上樣池中加入0.5 mL TBS-T預濕Amicon? Pro。1,000×g離心1 min。 2. 加入抗體樣品 ? 對于比較稀釋的樣品(< 1 mg/mL) - 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)。 - 加上至多1 mL抗體樣品, 4,000×g離心15 min。 ? 對于濃度較高的的樣品(≥ 1 mg/mL) - 在Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)中加入至多100μL樣品。 - 在Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)中加入至多100μL樣品。 大體積樣品濃縮 Centricon? Plus-70離心濃縮裝置 用于15-70mL生物溶液的快速濃縮等操作。70mL的樣品在25分鐘內濃縮至350μL;死體積設計確保樣品不會被離干而損失。
基于 Millipore? 先進的膜過濾技術,默克密理博開發了獨特的腺***及慢***純化與濃縮試劑盒。試劑盒中已經包括了必需的 Steriflip? 過濾裝置和超濾管,能在短短 2 小時內安全、快捷地獲得高產***。 節約時間:整個操作需 2 小時。 產量高:***回收率超過 70%。 整體體驗極好:流程簡便而***質量高。 設計新穎易操作:Steriflip? 過濾裝置可以替代昂貴的設備,使原本繁瑣凌亂的操作變得簡單而標準。 安全:封閉的真空抽濾設計,完全避免樣品飛濺造 成的***污染和損失。益啟生物公司就帶您了解一下超濾濃縮管的特點。
經典離心濃縮裝置 Amicon? Ultra 離心超濾管 反轉離心回收 ?反轉離心回收設計使蛋白樣品,特別是小體積樣品高效 回收,避免***頭吸取造成的樣品丟失或操作錯誤 ?0.5mL、2mL 和 70mL 超濾管設計為反轉回收模式 樣品吸附損失小 ?Ultracel? 超濾膜為密理博超濾產品特有的設 計,非特異吸附比較低,減少樣品的吸附損失 ?膜和聚丙烯管都是低吸附材質,保證> 90% 回收率 ?豎膜切向流設計,不像橫膜那樣容易堵,樣品 損失少 ?濃縮速度超快,**少需 10 分鐘益啟生物公司的超濾濃縮管系列有很多。浦東新區默克2ml超濾濃縮管代理價
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用超濾對分子進行分級 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實際。事實上,膜的規格描述是基于截留而非通過 的性質。一項實驗中,采用 100k NMWL 濾膜,大于 100kDa 的分子截 留率 >90%,但這時比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜, 75kDa 的分子截留率為 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留?;旌系? 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡單和容易。實 踐中,如果要分離兩種大分子,它們之間的分子量差異應該達到 10 倍 以上,或至少膜的 NMWL 規格在兩種蛋白之間,則可達到比較理想的 分離。如果蛋白溶液較為稀釋,低壓下操作也有助于達到更好的效果。靜安區離心濃縮管聯系電話
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