無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據樣品的粘稠程度,以及需要制備的目標外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便達到更好的得率和操作體驗。 樣品體積大于 30mL 時可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管,請注意攪拌式超濾杯在200mL 以內時吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進一步提高特定外泌體的純度,可選用包被相應抗體的磁珠進行親和純化精制。超濾濃縮管的優點有很多。浦東新區默克15ml超濾濃縮管聯系方式
Amicon? Ultra超濾管的膜材質為默克密理博特有的 Ultracel? 再生纖維素膜,生產工藝嚴格,截留分子量明確而精細,蛋白吸附損失基本上大概小。 如果要用超濾的方法分離兩種蛋白,那么這兩個蛋白的大小需要相差多少? 按照經驗,建議兩個蛋白的分子量要相差一個數量級(10倍)。 Amicon? Ultra與70%乙醇是兼容的,但是對滅菌處理的具體方法沒有做相關的測試,所以無法提供更進一步的參考信息。 Amicon? Ultra都是采用熱封設計,不可以用高壓高溫滅菌。 不保證超濾管不包含RNA酶,建議用0.1% DEPC在37度浸泡2小時,以完全滅活RNA酶;殘留的DEPC可以用Milli-Q?超純水洗滌除去。上海默克離心濃縮管哪家好超濾濃縮管和其他的空壓機有什么區別呢?
Amicon? Pro純化超濾管簡明操作指南 親和純化 用于純化GST?Tag,His?Tag等重組表達蛋白及抗體,適合~0.5 mL裂解液操作 6次低速離心,總耗時~100分鐘(含65分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂(50%懸濁液)和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h,其間可溫和攪動促進結合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結合雜質。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液,1,000×g離心1 min。 外泌體用于細胞學或動物實驗前的無菌處理 已經經過上述方法制備的外泌體在進行細胞或動物實驗之前還需進行一步除菌過濾,這個時候考慮到得率,應該采用離心法處理,以減少過濾時的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對樣品進行澄清[目錄號SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]
這種小管適合在1.5mL離心機中使用,其Ultracel?超濾膜對于蛋白及其它成分都表現出 極低的非特異性結合,連同醫藥級O型圈封閉設計,確保更少的樣品丟失,更穩定的數據結果。諸多考慮周到的精細設計使Microcon?成為比較好用的樣品制備工具之一。 特點與優點: 低吸附膜和反轉回收設計,即使是小體積、低濃度樣品得率也能達到95%以上 可以用產品自帶的1.5mL樣品收集管存儲濾過液和濃縮產物 濃縮倍數可達100X 操作簡便快捷,易于標準化。 Microcon? DNA Fast Flow 超濾管 專門設計用于從含有SDS的溶液中濃縮和回收基因組DNA。管子和膜均為低非特異性吸附的材質,醫用級O型圈密封,保證了在洗滌步驟中樣品丟失**少。反轉回收設計,即使樣品量很小也能獲得理想的得率,濃縮倍數可以達到20X。超濾濃縮管的系列有很多種。
默克密理博 Amicon? Ultra 離心式超濾管因其完美的設計,一經推出即成為生物樣品操作的行業頭牌產品。不論是蛋白、核酸、病-毒-或顆粒物,抑或低濃度樣品或寶貴的活性樣品,Amicon? Ultra 都能兼顧高回收率和操作的方便性及標準化,并滿足下游各種應用的要求,使研究者處理樣品時倍感輕松。 這款Amicon Ultra 15 mL離心式過濾器借助10 kDa NMWL的濾膜可以進行蛋白濃縮。Amicon Ultra離心式過濾器是蛋白純化、蛋白濃縮和脫鹽的理想工具。 Amicon? Ultra 超濾管的獨特優點: 有效濃縮同時保證高的蛋白回收率 1.合理的死體積設計 2.避免樣品離干而降低回收率 3.便于估計和控制樣品濃縮倍數 4.重復性好,便于樣品數據相互比較根據您的具體需求選擇不同的超濾濃縮管設計。浦東新區默克15ml超濾濃縮管聯系方式
那么超濾濃縮管施工的優勢都有哪些呢?浦東新區默克15ml超濾濃縮管聯系方式
上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(有5種截留分子量規格可選)。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。孵育5 min。 7. 4,000×g離心15 min。 8. 加上蛋白樣品**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min,置換緩沖液的同時進行濃縮。 9. 倒轉Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管,1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。 * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管~1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法,但溶液體積和離心時間等需要略加優化。 用Protein A或G對抗體進行親和純化浦東新區默克15ml超濾濃縮管聯系方式
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