Amicon? Pro純化超濾管簡明操作指南 親和純化 用于純化GST?Tag,His?Tag等重組表達蛋白及抗體,適合~0.5 mL裂解液操作 6次低速離心,總耗時~100分鐘(含65分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂(50%懸濁液)和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h,其間可溫和攪動促進結合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結合雜質。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液,1,000×g離心1 min。 外泌體用于細胞學或動物實驗前的無菌處理 已經經過上述方法制備的外泌體在進行細胞或動物實驗之前還需進行一步除菌過濾,這個時候考慮到得率,應該采用離心法處理,以減少過濾時的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對樣品進行澄清[目錄號SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]上海超濾濃縮管代理銷售哪家比較好?江蘇超濾濃縮管咨詢報價
操作模式 常規與切向流 : 常規溶液過濾(NFF)中液體在壓力或真空驅動下直接流 過膜。大的顆粒物被膜截留并堆積在膜上,小分子則通過膜流出。NFF 常 用于無菌過濾、澄清預過濾及*** / 蛋白樣品制備等。切向流過濾(TFF) 液體流過時與膜表面呈一定角度,被膜阻擋的大顆粒物不會累積在膜表 面,而且還會被切向流從膜表面掃除,因此 TFF 成為按分子大小不同分離 的主流方法。TFF 在大體積樣品處理中是主要的操作方法,而現在,TFF 技術被用于 Amicon? Ultra 離心式超濾管的設計中,使小體積樣品的濃縮 和分離操作也變得更加方便。崇明區默克15ml超濾濃縮管代理價超濾濃縮管的好處有很多。
外泌體的精制磁珠法富集精制外泌體:300μg樣品(相當于300μg總蛋白)用含有5μg anti-CD63抗體的溶液稀釋,與protein A/G磁珠共孵育1hr,漂洗后用0.2M glycine洗脫。如果要先將抗體偶聯在磁珠上(以避免抗體洗脫下來對外泌體的干擾),請參考默克磁珠操作說明書。(Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3))。推薦使用試劑目錄號信息:cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已經建立了基于“微濾+超濾”的外泌體制備操作標準,相較于需要昂貴的設備及繁瑣操作的超速密度梯度離心,用實驗室常見的工具解決外泌體制備的高大上問題,真是惠而不費,不亦樂乎?
加入漂洗緩沖液(體積是樹脂柱床體積的7.5倍)并離心。< 500μL樹脂時1,000×g離心1 min;≥ 500μL樹脂時2,000×g離心4 min。 4. 使用一個新的50 mL離心管作為收集管。 5. 加入洗脫緩沖液(體積是樹脂柱床體積的5倍)與樹脂混勻并離心。< 500μL樹脂時1,000×g離心1 min;≥ 500μL樹脂時2,000×g離心4 min?;厥展苤屑醇兓玫牡鞍?。 6. 如果是純化抗體,在純化產物中加入中和緩沖液。 * 進行較大體積操作時,可以延長結合反應時間,并用膠帶密封上樣池上沿以便顛倒混勻操作。離心前去除膠帶即可。選購不帶Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管的Amicon? Pro時請使用目錄號ACS500024。益啟生物公司主營超濾濃縮管銷售。
濃度:當需要截留的樣品濃度很低時,通量通常不受濃度影響。操作過 程中,隨著溶質濃度的升高,增加的粘滯性和極化將導致通量降低。 溫度:粗體,作為獲得壓力、濃度一樣的詞條通常增加操作時的溫度可 以提高超濾效率。每增加 1℃蛋白擴散率增加 3-3.5%,同時溶液粘度降低。 實踐中一般是以樣品和設備能耐受的比較高溫度來操作。 pH:改換溶液和 / 或 pH 常常改變分子結構,蛋白尤其如此。在蛋白的 pI 值蛋白會沉淀,產生堵塞和得率損失。 污垢:溶液中除了目的分子造成的濃差極化,還有其它小顆粒和分子會 在膜上富集和沉淀,逐漸堆積在膜孔上或膜孔結構中,形成結晶和沉淀。超濾濃縮管的優缺點您知道嗎?虹口區Merck超濾濃縮管商家
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抗體標記 適合25-200μg樣品操作 5次低速離心,總耗時~50分鐘 1. 在上樣池中加入0.5 mL TBS-T預濕Amicon? Pro。1,000×g離心1 min。 2. 加入抗體樣品 ? 對于比較稀釋的樣品(< 1 mg/mL) - 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)。 - 加上至多1 mL抗體樣品, 4,000×g離心15 min。 ? 對于濃度較高的的樣品(≥ 1 mg/mL) - 在Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)中加入至多100μL樣品。 - 在Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)中加入至多100μL樣品。 大體積樣品濃縮 Centricon? Plus-70離心濃縮裝置 用于15-70mL生物溶液的快速濃縮等操作。70mL的樣品在25分鐘內濃縮至350μL;死體積設計確保樣品不會被離干而損失。 江蘇超濾濃縮管咨詢報價
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