近年來隨著分離純化技術的提高,關于外泌小體的研究成果頗豐;這進一步吸引了越來越多領域的課題將外泌體納入研究對象。研究的前提是方便、高效、標準化地分離純化外泌小體。經過近20年的探索,已經建立了超速離心法、沉淀法、色譜法、親和純化法等。在大量實踐中大家逐漸認識到根據下游研究對樣品的要求,以及起始樣品的規模、數量,可以選擇不同的外泌體制備策略。因不需要特殊的設備和試劑盒,對操作人員也沒有特別的經驗要求,超濾法后來居上,成為實驗室中制備外泌體的通用方法。超濾濃縮管咨詢服務電話多少呢。虹口區默克離心濃縮管哪家優惠
無血清樣品選擇 3kDa 孔徑是為了盡可能提高外泌體的回收率。 有血清樣品選擇100kDa/500kDa孔徑是為了盡可能去除細胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌體的白蛋白造成的影響。 研究者可根據樣品的粘稠程度,以及需要制備的目標外泌體 / 囊泡 / 顆粒的大小分布來選擇和優化超濾孔徑(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便達到更好的得率和操作體驗。 樣品體積大于 30mL 時可以考慮用超濾杯或 Centricon-70 超濾管,請注意攪拌式超濾杯在200mL 以內時吸附損耗可能較離心式超濾管略偏高。如需進一步提高特定外泌體的純度,可選用包被相應抗體的磁珠進行親和純化精制。上海默克4ml超濾濃縮管代理價格上海超濾濃縮管哪家比較專業。
抗體標記 適合25-200μg樣品操作 5次低速離心,總耗時~50分鐘 1. 在上樣池中加入0.5 mL TBS-T預濕Amicon? Pro。1,000×g離心1 min。 2. 加入抗體樣品 ? 對于比較稀釋的樣品(< 1 mg/mL) - 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)。 - 加上至多1 mL抗體樣品, 4,000×g離心15 min。 ? 對于濃度較高的的樣品(≥ 1 mg/mL) - 在Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)中加入至多100μL樣品。 - 在Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(建議使用50k MWCO)中加入至多100μL樣品。 大體積樣品濃縮 Centricon? Plus-70離心濃縮裝置 用于15-70mL生物溶液的快速濃縮等操作。70mL的樣品在25分鐘內濃縮至350μL;死體積設計確保樣品不會被離干而損失。
對于慢***推薦Amicon? Ultra 100kDa; 對于腺***推薦Amicon? Ultra 50kDa。具體的操作步驟可以參考***濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產品使用說明書。另提供AAV(腺相關***)的制備方法供參考。 去污劑因其獨特的性質,當濃度大于臨界微團濃度(Critical Micelle Concentration, CMC)時,去污劑分子會聚集形成微團而改變分子構象,這有可能會影響去污劑的去除效果。 Amicon? Ultra超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q?水預清洗。如果干擾仍然存在,用0.1 N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。超濾濃縮管批發價格是多少呢。
蛋白親和純化(無需換液和濃縮) * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管~1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法,但溶液體積和離心時間等需要略加優化。 3次低速離心,總耗時~75分鐘(含60分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入至多1000μL親和純化樹脂(沉降的柱床體積)和至多9 mL漂洗緩沖液。1,000×g離心1 min平衡樹脂。(柱床)樹脂量≥ 500μL時采用2,000×g離心4 min。 2. 加入至多9 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h*,其間可溫和攪動促進結合。那么超濾濃縮管施工的優勢都有哪些呢?南京Millipore超濾濃縮管報價
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樣品的澄清、過濾和除菌 Ultrafree?-MC和Ultrafree?-CL微濾管 Ultrafree?-MC(0.5mL)和Ultrafree?-CL(2mL)是一次性使用的微濾離心管,可以用于各種水性樣品和在某些溶劑中的樣品除顆粒物、除沉淀的處理。提供兩種體積及多種膜孔徑以及已經經過無菌處理的產品供選擇。Ultrafree?微濾離心管操作簡便、樣品回收率高且重復性很好,是蛋白和核酸樣品處理的理想選擇。 特點與優點 有0.1-5.0μm五種膜孔徑供選擇 采用高回收率的親水Durapore? (PVDF)膜和親水PTFE膜 提供無菌包裝和非無菌包裝形式產品 過濾速度快,數據穩定、重現性好 上樣體積為0.5mL (MC)或2mL (CL) 配合1.5mL離心管固定轉子(MC)或15mL離心管轉子使用 頂蓋顏色標識易于區分膜孔徑虹口區默克離心濃縮管哪家優惠
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