Amicon? Pro純化超濾管簡明操作指南 親和純化 用于純化GST?Tag,His?Tag等重組表達蛋白及抗體,適合~0.5 mL裂解液操作 6次低速離心,總耗時~100分鐘(含65分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂(50%懸濁液)和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h,其間可溫和攪動促進結合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結合雜質。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液,1,000×g離心1 min。 外泌體用于細胞學或動物實驗前的無菌處理 已經經過上述方法制備的外泌體在進行細胞或動物實驗之前還需進行一步除菌過濾,這個時候考慮到得率,應該采用離心法處理,以減少過濾時的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對樣品進行澄清[目錄號SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]超濾濃縮管的優點有很多。楊浦區默克0.5ml超濾濃縮管
脫鹽/緩沖液置換并濃縮 5次低速離心,總耗時~35分鐘 1. 在上樣池中加入0.5 mL TBS-T預濕Amicon? Pro。1,000×g離心1 min。 2. 優化選做:加入1.5 mL用于置換的緩沖液,1,000×g離心1 min。 3. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(有5種截留分子量規格可選)。 4. 加入1.5 mL樣品,4,000×g離心15 min進行濃縮。 5. 加入1.5 mL需要置換的緩沖液,4,000×g離心15 min,換液的同時進行濃縮。 6. 倒轉Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管,1,000×g離心回收處理好的蛋白。 * 進行較大體積操作時,可以適當延長離心時間,也可參考Amicon? Pro完整操作說明書 查看詳細信息。青浦區超濾濃縮管咨詢報價上海超濾濃縮管代理銷售哪家比較好?
這種小管適合在1.5mL離心機中使用,其Ultracel?超濾膜對于蛋白及其它成分都表現出 極低的非特異性結合,連同醫藥級O型圈封閉設計,確保更少的樣品丟失,更穩定的數據結果。諸多考慮周到的精細設計使Microcon?成為比較好用的樣品制備工具之一。 特點與優點: 低吸附膜和反轉回收設計,即使是小體積、低濃度樣品得率也能達到95%以上 可以用產品自帶的1.5mL樣品收集管存儲濾過液和濃縮產物 濃縮倍數可達100X 操作簡便快捷,易于標準化。 Microcon? DNA Fast Flow 超濾管 專門設計用于從含有SDS的溶液中濃縮和回收基因組DNA。管子和膜均為低非特異性吸附的材質,醫用級O型圈密封,保證了在洗滌步驟中樣品丟失**少。反轉回收設計,即使樣品量很小也能獲得理想的得率,濃縮倍數可以達到20X。
首先,Amicon? Ultra超濾管的蛋白比較低起始濃度為25ug/ml。請確保樣本的起始濃度大于這個濃度。其次,如果問題仍然出現,請不要丟棄樣本濾過液以便用于分析可能的原因: 1)如果目的樣本在濾過液中,那么請排查: a)是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)? b)使用的離心力是否是在限定范圍內?如果使用的是rpm,請換算成相應的g離心力,具體換算方法請垂詢。 c)離心機**近是否有校準過? d)是否***嘗試這個蛋白?超濾濃縮管的優勢您了解多少呢?
外泌小體(Exosome)是一種囊泡結構,直徑通常在30-150nm,常見于正常體液和病理樣本,培養細胞也可分泌。研究人員已經在血液、唾液、尿液、母乳等中發現外泌小體,其運載的蛋白和核酸涉及其細胞間物資、信息交流,影響和調控著多方面的生理功能,包括**的發生、免疫促進、凋亡調控、血管的生成、炎癥的反應及發育和分化等。由于在體液中出現,外泌小體對于臨床生物標志物檢測來說特別有利,成為體外診斷、biomarker研究的新熱點。上海超濾濃縮管批發商。寶山區Millipore超濾濃縮管聯系方式
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蛋白親和純化(無需換液和濃縮) * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管~1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法,但溶液體積和離心時間等需要略加優化。 3次低速離心,總耗時~75分鐘(含60分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入至多1000μL親和純化樹脂(沉降的柱床體積)和至多9 mL漂洗緩沖液。1,000×g離心1 min平衡樹脂。(柱床)樹脂量≥ 500μL時采用2,000×g離心4 min。 2. 加入至多9 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h*,其間可溫和攪動促進結合。楊浦區默克0.5ml超濾濃縮管
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