培養(yǎng)基的配制:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方稱取各種藥品,加足所需水量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水調成糊狀,加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95-97℃,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3、調PH:用1N的鹽酸或1N的NaOH把培養(yǎng)基調節(jié)到所要求的值。4、過濾:濾紙或棉花進行過濾。5、分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。(1)三角瓶:若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,較多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。(2)試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml,約試管的1/4高度。固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml,約試管的1/5高度。6、包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。7、滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。控制培養(yǎng)基的條件,控制培養(yǎng)基的pH配制培養(yǎng)基必須根據微生物的特點調節(jié)pH。中國香港進口培養(yǎng)基制備儀
培養(yǎng)基的種類:培養(yǎng)基種類很多,根據配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據培養(yǎng)功能可分為基礎培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等;根據使用范圍可分為細菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基、病菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養(yǎng)基既是提供細胞營養(yǎng)和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。中國香港進口培養(yǎng)基制備儀培養(yǎng)基根據物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當。分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中,隨該批培養(yǎng)基同時滅菌,以為測定該批培養(yǎng)基較終pH之用。
配制培養(yǎng)基需要哪些制備:(1)稱出規(guī)定數量的瓊脂和蔗糖,加水直到培養(yǎng)基較終容積的34,加熱溶解,完全融解后的溶液是透明的。在配制液體培養(yǎng)基(不加瓊脂)時無需加熱。(2)按需要加入一定量的各種貯存母液,包括生長調節(jié)物質和其他特殊附加物。吸取母液要使用專一的移液管。如有必要,培養(yǎng)基中所需的維生素,可在高壓滅菌之后通過減壓過濾裝置或微孔過濾器滅菌后再加入。(3)蒸餾水定容。充分混合后調節(jié)培養(yǎng)基的pH,一般以5.66.0為好。(4)培養(yǎng)基分裝,分裝量一般以占培養(yǎng)容器的1514為宜。之后在24h內完成高壓滅菌,也可以高壓滅菌后再進行培養(yǎng)基的無菌分裝,室溫下存放備用。暫時不用的培養(yǎng)基應放置于10攝氏度下保存,而含有生長調節(jié)物質的培養(yǎng)基在45攝氏度保存更佳。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低,應在配制培養(yǎng)基時加以調節(jié)。
培養(yǎng)基制備的九個步驟關注要點:步驟一:稱取數量:用1/100的電子天平稱出培養(yǎng)基所需的藥物。首先參照配方計算出配制相應培養(yǎng)基需要各成分的數量,然后用電子天平準確稱取重量。步驟二:培養(yǎng)基溶化:將培養(yǎng)基納入燒杯容器中,加小適量的水,緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養(yǎng)基中不含瓊脂,則不需要對培養(yǎng)基加熱;相反含有瓊脂,就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。步驟三:調培養(yǎng)基pH:雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質,可以盡量使培養(yǎng)基的pH值保持在標準范圍內,但如果配制的培養(yǎng)基不能要求,則必須進行必要的調整。如果您有校準過的pH計,則可以使用pH計。步驟四:培養(yǎng)基過濾:如果對配制的培養(yǎng)基沒有特殊要求,這一步可以省略。步驟五:培養(yǎng)基分裝:準備好的培養(yǎng)基根據用途不同分為燒瓶、試管等容器,分裝試管量大采用自動分液器,分裝試管量小,可以用漏斗分液。確定這批培養(yǎng)基的較終pH值。步驟六:培養(yǎng)基滅菌處理:分裝完成的培養(yǎng)基應馬上滅菌。培養(yǎng)基一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。中國香港進口培養(yǎng)基制備儀
一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。中國香港進口培養(yǎng)基制備儀
培養(yǎng)基的類別按照培養(yǎng)基的成分來分:培養(yǎng)基按其所含成分,可分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基三類。(1)合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是己知的各種化學物質。這種培養(yǎng)基的化學成分清楚,組成成分精確,重復性強,但價格較貴,而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基等。(2)天然培養(yǎng)基。由天然物質制成,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,前者用于培養(yǎng)霉菌,后者用于培養(yǎng)細菌。這類培養(yǎng)基的化學成分很不恒定,也難以確定,但配制方便,營養(yǎng)豐富,所以常被采用。(3)半合成培養(yǎng)基。在天然有機物的基礎上適當加入已知成分的無機鹽類,或在合成培養(yǎng)基的基礎上添加某些天然成分,如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質的需要。中國香港進口培養(yǎng)基制備儀
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