外泌體中存在著某些特定的蛋白質、脂質和多糖,基于抗原–抗體特異性識別和結合作用原理,可將外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯蛋白、上皮細胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附著在平板、磁珠、二氧化硅、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯免疫吸附法和磁珠法等。酶聯免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作為抗體附著介質,其結果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物標志物的表達,也可以瞬時讀出外泌體的產量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鏈霉親和素的磁珠,與樣品一起孵育后可通過磁泳將被結合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體產率。幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白,回收量高,操作重復性好。江西外泌體iTRAQ
由于這些胞外囊泡(EV)與生理和病理狀況之間的關系,人們對EV的興趣呈指數增長。EVs對新型診斷和臨床轉化有很大希望。近的研究已經將這些交流所需的一些任務歸結為細胞外囊泡(如外泌體和微泡),主要參與髓鞘膠質細胞和神經元之間的相互信號傳遞從而促進神經元存活、由小膠質細胞介導的免疫應答、突觸組裝和可塑性。這種囊泡也被認為是神經變性疾病和腦病擴散的重要因素。這些細胞外囊泡功能為以前無法識別的神經系統內跨細胞相互作用增加了新方式。江西外泌體iTRAQ外泌體無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。
液體活檢是一種非侵入性的血液檢測突破性技術,能早期快速地檢測中流及其病灶或者轉移過程中釋放到血液中的循環中流細胞(circulatingtumorcell,CTC)、循環中流DNA(circulatingtumorDNA,ctDNA)和中流外泌體等中流組分。中流外泌體作為液體活檢的一個重要組成,基于其內容物成分多樣和穩定等優勢,正成為中流標志物相關研究的熱點。中流來源納米大小的外泌體具有易通過血腦屏障、天然的歸巢特性、雙分子層脂質結構的穩定性和高效的生物相容性等特征。因此,中流外泌體正成為中流靶向zhiliao理想的載體,尤其是工程化外泌體更表現出很好的中流靶向干預和增強藥物zhiliao的效果。
肺病細胞來源外泌體(LCC-exosome)可以通過刺激種瘤血管的形成來促進種瘤的生長。據相關報道稱,LCC-exosome中的miR-210可以通過調節基質細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量,促進種瘤血管的生成;而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過開啟脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來促進肺病的生血管作用。此外,有研究發現,外泌體中的內容物可以觸發上皮-間質轉化(EMT)。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加,促使人正常支氣管上皮細胞出現EMT,從而使肺支氣管正常上皮細胞出現增殖,遷移能力??茖W家也嘗試利用外泌體的壓制發病機制功能。以前無法用超速離心法提取的微囊泡,也通過運用PS親和法實現高純度提取。
有研究表明外泌體通過喚醒瘤相關信號通路、誘導免疫耐受、重塑細胞外基質、增強瘤細胞侵襲性和調控瘤微環境促進瘤的發生和發展,外泌體在瘤的診斷上有諸多優勢:外泌體可保護其中的核酸類物質,防止其迅速降解;外泌體的形成與親源細胞的狀態密切相關;針對外泌體內容物的檢測比傳統的瘤標志物更具有特異性;外泌體寬泛存在于多種體液樣本中,以其為基礎的瘤診斷可在病情發展過程中及時監測分子標志物的變化,這種檢測更易監控且樣本更易收集。外泌體具有良好的生物兼容性、穩定性和內在靶向性,使其在藥物遞送方向大有潛力。江西外泌體iTRAQ
外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即:對各種外泌體的分類。江西外泌體iTRAQ
唾液中包含來自于唾液腺上皮體外細胞的外泌體,Michael等從唾液中提取外泌體,并對唾液外泌體中的miRNA進行分析,發現此類miRNA有望作為成為唾液腺疾病的生物標志物。Wu等成功從汗液中提取得到外泌體,并進行蛋白質組學分析,在汗液外泌體中鑒定到1062種蛋白質,其中包含多種抗jun肽和免疫因子,表明汗液外泌體參與皮膚免疫。Liu等從患有阿爾茲海默癥患小鼠的腦脊髓液中提取得到外泌體,并與野生型小鼠進行對比,發現實驗組miR-193b明顯下調。江西外泌體iTRAQ