聚合酶鏈反應：等位基因特異性聚合酶鏈反應:基于單核苷酸變異的診斷或克隆技術(shù)(snv不要與 SNPs 混淆)(患者的單堿基差異)。它需要事先知道DNA序列，包括等位基因之間的差異，并使用3’端包含SNV的引物(通常包含SNV周圍的堿基對緩沖液)。在模板和引物不匹配的情況下，嚴格條件下的PCR擴增效率要低得多，因此用單核苷酸多態(tài)性特異性引物成功擴增表明序列中存在特異性單核苷酸多態(tài)性。有關(guān)更多信息，請參見單核苷酸多態(tài)性基因分型。裝配聚合酶鏈反應或者聚合酶循環(huán)組件:通過對具有短重疊片段的長寡核苷酸池進行PCR來人工合成長DNA序列。寡核苷酸在有義和反義方向之間交替，重疊片段決定聚合酶鏈反應片段的順序，從而選擇性地產(chǎn)生很終的長DNA產(chǎn)物。聚合酶鏈式反應：模板的制備，PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。廈門血液PCR檢測技術(shù)研究方案

聚合酶鏈反應也可以用作以下敏感試驗的一部分組織分型，對移植至關(guān)重要。截至2008年，甚至有人提議用聚合酶鏈反應檢測取代傳統(tǒng)的血型抗體檢測。許多形式的病癥涉及致病基因的改變。通過使用基于聚合酶鏈反應的測試來研究這些突變，醫(yī)治方案有時可以根據(jù)患者的不同而不同。聚合酶鏈反應可以早期診斷惡性疾病，如白血病和淋巴瘤，這是目前病癥研究中發(fā)展很快的，并且已經(jīng)被常規(guī)使用。PCR檢測可以直接在基因組DNA樣品上進行，以檢測易位特異性惡性細胞，其靈敏度至少是其他方法的10，000倍。聚合酶鏈反應在醫(yī)學領(lǐng)域非常有用，因為它允許分離和擴增病癥抑制劑。例如，定量PCR可以用于量化和分析單細胞，以及識別DNA、mRNA和蛋白質(zhì)的確認和組合。廈門血液PCR檢測技術(shù)研究方案多重連接依賴探針擴增允許用單個引物對擴增多個靶標，從而避免多重PCR的分辨率限制。

聚合酶鏈式：PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構(gòu)成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應作準備；模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2-4分鐘，2-3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。　PCR技術(shù)敏感性高，特異性強，操作簡便、快速，在生命科學研究、食品衛(wèi)生、醫(yī)療、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測等諸多方面都具有重要的應用價值。

聚合酶鏈式反應的常見問題：出現(xiàn)非特異性擴增帶：PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關(guān)。其次是酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。其對策有：必要時重新設(shè)計引 物。減低酶量或調(diào)換另一來源的酶。降低引物量，適當增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。適當提高退火溫度或采用二溫度點法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）。聚合酶鏈反應是一種非常強大和實用的研究工具。

聚合酶鏈反應注意事項：在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂；為了防止非特異性擴增，必須設(shè)陰性對照；內(nèi)參的設(shè)定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內(nèi)參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動蛋白）等。其目的在于避免RNA定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應體系中擴增效率不均一各孔間的溫度差等所造成的誤差；PCR不能進入平臺期，出現(xiàn)平臺效應與所擴增的目的基因的長度、序列、二級結(jié)構(gòu)以及目標DNA起始的數(shù)量有關(guān)。故對于每一個目標序列出現(xiàn)平臺效應的循環(huán)數(shù)，均應通過單獨實驗來確定；防止DNA的污染： 采用DNA酶處理RNA； 在可能的情況下，將PCR引物置于基因的不同外顯子，以消除基因和mRNA的共線性。熱啟動聚合酶鏈式反應可以通過將反應組分加熱到變性溫度在加入聚合酶之前。廈門血液PCR檢測技術(shù)研究方案

聚合酶鏈反應應經(jīng)常使用帶有一次性柱塞和超長移液器吸頭的移液器。廈門血液PCR檢測技術(shù)研究方案

聚合酶鏈式反應PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構(gòu)成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應作準備；模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基互補配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈，重復循環(huán)變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。廈門血液PCR檢測技術(shù)研究方案

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