國際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性,不會產生沉淀,同時能縮短血清融化時間。關于胎牛血清的滅活:真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補體,如果針對補體滅活的話,就不需要。其他情況根據實驗設計來決定。胎牛血清的濃度:胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養基中,混合后配成完全培養基。曾有文獻報道,不同胎牛血清濃度對細胞存在一定的影響,尤其是干細胞和原代細胞。具體很好濃度需要用戶根據自己的實驗來確定,以既保證培養的效果,又避免血清的浪費。胎牛血清的牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性。麗水優等血清廠家
血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。胎牛血清的細菌內有毒的 ≤5(EU/ml);牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性;支持細胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生長曲線(接種濃度)較為大增殖濃度≥2.5×106 個/ml;細胞倍增時間 ≤15h;克隆率 ≥85%。麗水優等血清廠家血清的主要作用是提供基本營養物質、提供和各種生長因子、提供結合蛋白。
胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質較為高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較為少。胎牛血清:性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體;蛋白質含量:3.5%~5.0%( w/v);血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v);無菌檢驗:陰性;支原體檢驗: 陰性;細菌內有毒的 ≤5(EU/ml);牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性。
血清的安全風險因素主要有以下方面:地理因素,地理因素包括血清產地的流行病學趨勢、基礎設施情況以及血源供應量。措施得當可以預防能避免的動物疾病,同時產地國穩定可靠的基礎設施,對保證供應鏈的安全也十分必要。血源是否充足則決定了血清是否可源源不斷地持續供應。生產,生產遵循cGMP指南,則可保證血清質量,降低有關無菌過濾、摻加和標簽錯誤的風險。cGMP為現場審核的開展提供了框架。生產過程中對血清進行有效的無菌過濾也是十分重要的。產品質控,有效的無菌過濾使得細菌污染的風險很低。對于支原體和病毒篩查,一些相關規范內部存在一定的方法靈活性,這使得采取不同方法進行支原體和病毒篩查成為可能,并且有時使得要篩查的病毒種類無需太多。有效輻照,要進一步降低外源因子風險,可對血清進行輻照(25–40 kGy)。但輻照并不能保證病毒污染的完全去除。輻照過量會導致FBS效能下降。胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。
那么如何保障胎牛血清的品質呢:內有毒的,內有毒的含量越低的血清,胎牛血清級別就越高:內有毒的≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;10EU/ml<內有毒的≤ 25EU/ml時,此血清為優級胎牛血清;內有毒的≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;應選取內有毒的含量低的胎牛血清,使培養的細胞更健康。如果選取內有毒的較高的血清,細胞一直泡在“毒液”里,短期內細胞看不出太明顯的變化,但長期的話細胞會衰老得較快,從而對實驗結果造成嚴重影響。微生物:微生物包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。嚴格的生產工藝可以對細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制。同時3次0.1um過濾可以完全祛除支原體(支原體直徑0.2~0.3um)。通過病毒的檢測,可以嚴格控制牛腹瀉、牛細小、藍舌病等病毒。通過非瘋牛病疫區生產還可避免朊病毒。血清應保存在-5℃至-20℃,然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。麗水優等血清廠家
胎牛血清的其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。麗水優等血清廠家
添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養液,因為如果培養液有沉淀的存在,會使得其中培養的細胞產生大量的黑點,除此之外,細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質,總之出現這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養液中使用。注意解凍的方法:再高質量的胎牛血清也要在使用的時候堅持謹慎的原則,因此在解凍血清的時候,要細心地考慮到其解凍時體積一般會增大的特點,事先為血清預留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來,便不會發生污染或者容器凍裂的情況。另外較為好采用國際通用的解方式解凍血清。麗水優等血清廠家
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