HE染色觀察肝臟HE染色切片,首先要在顯微鏡下找到肝臟的標志性結構——肝小葉。顯微鏡首先調4倍物鏡,調準焦螺旋至視野清晰,可以看到肝小葉結構。人的肝小葉之間結締組織少,小葉分隔不明顯,但動物如豬或小鼠,其肝小葉分界非常明顯。肝小葉**有**靜脈,在橫切片上顯示為空洞。肝小葉之間為將物鏡調制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小葉結構。肝細胞以**靜脈為中心向周圍放射狀排列,稱為肝板。一般在20倍物鏡下可以清晰看到肝細胞。20倍物鏡下,肝細胞內染色為藍色的是細胞核,細胞核大而圓,居中,異染色質少而著色淺,能清晰看到核仁。肝細胞胞質豐富,多成嗜酸性,當蛋白質合成旺盛時,胞質內出現散在的嗜堿性物質。肝細胞內有豐富的細胞器比如溶酶體、高爾基體、內質網,等等,但是在光鏡下是無法看到的,需要在電鏡下才能觀察到。當然,肝小葉內除了肝細胞,還有膽小管、肝血竇、肝巨噬細胞等組織形態,但是在HE染色時并不容易觀察到。做肝臟HE染色切片主要目的一般都是為了觀察肝細胞形態是否完整、胞核有無增大、肝小葉形態是否完整,以檢測藥物等刺激因素對肝臟的損傷作用。HE染色技術幾種常見的染色問題。四川病理HE染色
HE染色常見問題:Q5:細胞核呈棕紅色改變答:蘇木素染液過度氧化;或蘇木素染色后反藍不足導致。應該立即更換蘇木素染色液。或在流動自來水(一般自來水PH7.5-7.8),或在稀釋的氨水溶液,或在0.2%碳酸氫鈉中適當浸泡,這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果。Q6:伊紅染色較淡答:伊紅的PH改變了(PH可能已大于5);或反藍液體未漂洗干凈,殘留后影響胞漿嗜酸性染色;或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久。對策:檢查伊紅染色液PH,可采用乙酸調至4.6-5.0。根據以上提示,調整實驗步驟。內蒙古比較好的HE染色分析HE染色結果如果使用計算機分析軟件分析?
HE染色注意事項:1、染色時調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后,分色這一步是關鍵,應在顯微鏡下控制進行,一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺,應重新染色后再行分色。3、切片經酒精脫水后,入二甲苯時可出現白色不透明狀態,此為脫水不徹底,應將切片退回無水酒精,更換酒精、二甲苯,以求徹底脫水與透明。4、在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經元形態。5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前,切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時,要用中性樹脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會褪色,所用樹脂濃度要適當,樹脂封固時不能有氣泡。
HE染色構成組織內蛋白質的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點。在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗面內質網及透明軟骨基質等均被堿性染料染色,這些物質稱為嗜堿性。而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質稱為嗜酸型。如果改變染色液的酸堿度,pH值升高時,則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜堿性;pH值降低時,原來被堿性染料染色的物質則可變為嗜酸性。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應。HE染色小貼士以及相關技巧分析。
HE 染色是病理的主要常規染色,其命名是因為主要使用的兩種試劑分別為Hematoxylin與Eosin Y,藉由電荷與吸附性的差異,組織結構對不同染料的結合程度不同,我們可以發現Hematoxylin呈色在細胞核,Eosin Y則表現在細胞質與間質,染色優良的片子可以幫助我們在顯微鏡下看到清晰的細胞型態與變化。染色步驟依試劑提供者的建議而有所差異,而且每個實驗室需要的顏色深淺不一,使用者可以依自己的需求另行調整,以下是力沛有限公司建議的HE染色步驟HE染色是常見的病理染色,是比較基礎是病理染色之一。黑龍江推薦的HE染色檢測
HE染色結果如何分析和讀片?四川病理HE染色
HE染色石蠟和冰凍切片樣本的處理,樣品處理:a.對于石蠟切片:二甲苯中脫蠟5-10分鐘;換用新鮮的二甲苯,再脫蠟5-10分鐘;無水乙醇5分鐘;90%乙醇2分;70%乙醇2分鐘;蒸餾水2分鐘.b.對于冰凍切片:蒸餾水2分鐘。c對于培養細胞:用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。蒸餾水洗滌2分鐘。換用新鮮的蒸餾水,再洗滌2分鐘。蘇木素伊紅(HE)染色對于上述處理好的樣品:蘇木素染色液染色5-10分鐘(可以根據染色結果和要求調整時間)。浸自來水中沖洗去多余的染色液,約10分鐘。蒸餾水再洗滌一遍(數秒鐘)。95%乙醇5秒。伊紅染色液染色30秒-2分鐘(可以根據染色結果和要求調整時間)。此時,如果需要直接觀察,可以用70%乙醇洗滌2次。如需脫水、透明后封片按后續步驟進行,70%乙醇洗滌后仍可按照后續步驟進行脫水、透明和封片處理。四川病理HE染色