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山東外泌體蛋白質組學

來源: 發布時間:2023年03月17日

酶聯免疫吸附測定(ELISA):將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上,將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中,由于抗體-抗原相互作用,表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內容物洗掉,并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體,當使用標準液(已知外泌體的量)創建標準曲線時,甚至可以進行定量。但是,此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理。同樣,流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。山東外泌體蛋白質組學

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外泌體病毒傳染:外泌體可以限制或促進病毒傳染。如IFNα或APOBEC3G等外泌體載體可通過限制病毒復制或增強抗病毒免疫來阻止傳染。病毒也可以劫持外泌體的生物發生機制來促進病毒的傳播。外泌體可以作為一個假包膜,通過四聚體蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互作用增強病毒進入受體細胞,并幫助逃避抗病毒免疫。病毒組分(蛋白質和miRNA)的共轉運也可能增強傳染性。外泌體介導的病毒轉移可能參與了病毒的遺傳協同和多重傳染.(CMV,巨細胞病毒;HSV-1,1型皰疹病毒)。山東外泌體蛋白質組學在免疫系統中,據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制。

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外泌體與免疫反應、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中樞的神經系統相關疾病和病癥進展相關。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應。這種外泌體介導的反應可以促進或阻止疾病。外泌體在調節復雜的細胞內通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途,包括神經退行性疾病和病癥。外泌體可被設計用于遞送不同的診療有效載荷,包括短干擾rna、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫調節劑,并具有將其遞送到預期目標的能力。

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為腫細胞的轉移準備轉移前微環境。用肺轉傾向的腫細胞細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的腫細胞細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發現不同部位傾向性的腫細胞細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉有關,而整合素αvβ5與肝轉有關。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取,進而分別降低了肺和肝的轉移。進一步研究發現外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數據分析顯示外泌體整合素可作為預測腫細胞轉移的部位傾向性的診斷指標。外泌體的提取的方式:PS親和法。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發現血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。

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PEG沉淀法分離外泌體:通常通過將無水聚合物,如聚乙二醇(PEG),與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結合水分子,增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力從而沉淀外泌體,然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速,簡便,可用于各種起始體積(從100μL到幾毫升)適合于各種研究和臨床設定。然而,這種方法缺乏選擇性,PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀,還會引起其他細胞外囊泡、細胞外蛋白質和蛋白質聚集體沉淀。因此,在使用這種方法之前,必須進行樣品預處理,例如過濾或超速離心,以減少較終的外泌體制劑的污染。外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,能綁定特異性的肽鏈。山東外泌體蛋白質組學

外泌體由各種類型的脂質和蛋白質組成,這些脂質和蛋白質衍生自形成外泌體的親代細胞。山東外泌體蛋白質組學

外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質等,可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調節成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠洸。┓矫娴臐摿ΑI綎|外泌體蛋白質組學

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