首先，Amicon? Ultra超濾管的蛋白比較低起始濃度為25ug/ml。請確保樣本的起始濃度大于這個濃度。其次，如果問題仍然出現，請不要丟棄樣本濾過液以便用于分析可能的原因： 1）如果目的樣本在濾過液中，那么請排查： a）是否選擇了合適截留分子量的超濾管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？ b）使用的離心力是否是在限定范圍內？如果使用的是rpm，請換算成相應的g離心力，具體換算方法請垂詢。 c）離心機**近是否有校準過？ d）是否***嘗試這個蛋白？超濾濃縮管和其他的空壓機有什么區別呢？松江區Millipore超濾濃縮管一級代理

Millipore超濾濃縮管設有反轉離心回收設計使蛋白樣品，特別是小體積樣品回收，避免吸頭吸取造成的樣品丟失或操作錯誤； 其中0.5mL、2mL 和 70mL 超濾管設計為反轉回收模式樣品吸附損失小； 合理的死體積設計，避免樣品離干而降低回收率； 能兼顧高回收率和操作的方便性及標準化，并滿足下游各種應用的要求，使研究者處理樣品時倍感輕松。 有效濃縮同時保證高的蛋白回收率 設計精巧、緊湊，一體化結構確保不會發生滲漏，即使是極為珍貴的樣品也能非常放心地操作。江蘇默克離心濃縮管報價根據您的具體需求選擇不同的超濾濃縮管設計。

用超濾對分子進行分級 通過選定截留分子量的超濾操作能精確地將混在大分子中的小分子去 除的想法常常不切實際。事實上，膜的規格描述是基于截留而非通過 的性質。一項實驗中，采用 100k NMWL 濾膜，大于 100kDa 的分子截 留率 >90%，但這時比膜孔徑小的分子并不是完全自由地通過濾膜， 75kDa 的分子截留率為 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的 溶液中的各 種成分通過膜并不像單一成分的溶液那么簡單和容易。實 踐中，如果要分離兩種大分子，它們之間的分子量差異應該達到 10 倍 以上，或至少膜的 NMWL 規格在兩種蛋白之間，則可達到比較理想的 分離。如果蛋白溶液較為稀釋，低壓下操作也有助于達到更好的效果。

上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（有5種截留分子量規格可選）。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。孵育5 min。 7. 4,000×g離心15 min。 8. 加上蛋白樣品**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min，置換緩沖液的同時進行濃縮。 9. 倒轉Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管，1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。 * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管～1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法，但溶液體積和離心時間等需要略加優化。 用Protein A或G對抗體進行親和純化益啟生物公司主要超濾濃縮管代理銷售。

如果能確保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話，那么有可能是這個目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性（構象差異）而影響濃縮效果，建議選用上一分子量級別的超濾管（如原本選用30k，此時可以選擇10k）。 2）如果目的樣本也不在濾過液中，那么： a）蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL？ b）用來確定樣本濃度的方法是什么？是否可信？ c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具體解決方法請參考上面的關于蛋白沉淀問題的解釋。上海超濾濃縮管供應商。靜安區默克4ml超濾濃縮管聯系人

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7次低速離心，總耗時~100分鐘（含60分鐘孵育時間） 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂（50%懸濁液）和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h，其間可溫和攪動促進結合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結合雜質。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液，1,000×g離心1 min。 5. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管（可選用50k MWCO型號）。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。4,000×g離心5 min。 7. 加入200μL 中和緩沖液。4,000×g離心15 min。 8. 加上**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min，置換緩沖液的同時進行濃縮。 9. 倒轉Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管，1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。松江區Millipore超濾濃縮管一級代理

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