培養基的使用:1.瓊脂培養基的融化:將培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經過高壓滅菌的培養基盡量減少重新加熱的時間,避免過度加熱。培養基融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min),以免玻璃容器發生破裂。融化后的培養基放入47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫,冷卻到47℃~50℃所需的時間取決于培養基的類型、體積和在水鍋里的分裝量。融化后內培養基應盡快使用,放置時間一般不超過4h。剩余的培養基固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養基,應根據相關標準,縮短融化后放置的時間。高效加熱和冷卻能力是培養基制備器的重要性能,直接關聯滅菌可靠性、培養基質量及實驗效率。北京全自動培養基制備器
培養基質量測試:(1)澄清度:水是細胞培養基的溶劑。細胞培養基中的營養成分只有完全溶解于水才能被細胞吸收攝取,細胞才能生長增殖,因此細胞培養基是否溶解以及培養液是否透明澄清直接影響培養基使用。該項目是通過對水溶解后的細胞培養基的澄清度檢查,判斷細胞培養基的澄清度。按中國藥典2005年版二部附錄ⅨB進行。(2)pH值:哺乳類動物細胞生長需要合適的酸堿度,pH過高或者過低都會導致細胞死亡。pH值的測定也可以檢查細胞培養基的批間差。清大天一標準規定取規定量供試品,用注射用水(水溫20℃-30℃)溶解至1L,加入規定量碳酸氫鈉到上述溶液中,用與細胞培養基溶液pH值相近的兩點標準緩沖液校準后的酸度計進行測定。按中國藥典2005年版二部附錄ⅥH進行;加入規定量的碳酸氫鈉到上述溶液中,按中國藥典2005年版二部附錄ⅥH進行。重慶不銹鋼內桶培養基制備器需具備±1°C以內的精確控溫,避免溫度波動影響滅菌效果或成分穩定性。
培養基的驗收:購買的培養基到貨后,應有專人做好培養基接受和培養基驗收工作,應仔細核對生產企業提供的關于培養基資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨物后都應對培養基的質量進行檢測,滿足檢測方法規定的要求后方可投入使用。培養基是液體、半固體或固體形式的,含天然或合成成分,用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。
牛肉膏蛋白胨液體培養基(又稱營養肉湯,用于培養細菌):成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸餾水(或去離子水)1000mL,pH7.4士0.2。制法:將各成分溶解于水中,于20~25℃條件下以1mol/LNaOH溶液用pH計校正pH7.4,分裝三角瓶(裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜),或試管(分裝量以試管高度的1/4左右為宜),0.1MPa滅菌15~20min后備用。化學分類:天然培養基指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養基。如牛肉膏蛋白胨培養基、麥芽汁培養基等。組合培養基又稱為合成培養基或綜合培養基,是一類按微生物的營養要求精確設計后用多種高純化學試劑配制成的培養基。如葡萄糖銨鹽培養基、淀粉硝酸鹽培養基等。半組合培養基指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。培養基制備器一鍵選擇培養皿類型;整合數據庫,預設培養皿尺寸選擇程序!
實驗室在制作培養基時候的經驗總結:培養基分裝:培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時較好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為恰當。分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20ml培養基于一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基較終pH之用。縮短冷卻時間可加速后續分裝、倒平板等操作。湖北瓊脂滅菌 培養基制備器
快速冷卻技術避免熱敏感成分降解,保護活性物質。 設備兼容不同規格容器,滿足小試到中試生產需求。北京全自動培養基制備器
培養基的類別按照培養基的成分來分:培養基按其所含成分,可分為合成培養基、天然培養基和半合成培養基三類。(1)合成培養基。合成培養基的各種成分完全是己知的各種化學物質。這種培養基的化學成分清楚,組成成分精確,重復性強,但價格較貴,而且微生物在這類培養基中生長較慢。如高氏一號合成培養基、察氏培養基等。(2)天然培養基。由天然物質制成,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,前者用于培養霉菌,后者用于培養細菌。這類培養基的化學成分很不恒定,也難以確定,但配制方便,營養豐富,所以常被采用。(3)半合成培養基。在天然有機物的基礎上適當加入已知成分的無機鹽類,或在合成培養基的基礎上添加某些天然成分,如培養霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。這類培養基能更有效地滿足微生物對營養物質的需要。北京全自動培養基制備器