HE染色原理:一、細胞核染色原理:蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。二、細胞漿染色原理:細胞漿內主要成分是蛋白質,為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系,當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時,大于蛋白質的等電點pH值,表現酸性電離,而帶負電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現時胞核也被染色,核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷(陽離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比讓您放心的實驗外包公司,專業HE染色實驗服務平臺。安徽推薦的HE染色外包
HE染色分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木精的醌型結構,使組織與色素分離而褪色。經蘇木精染色后,必須用0.5%鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去,在進行伊紅染色,才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此,在HE染色中分化是極為關鍵的一步。返藍作用:分化之后,蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態,呈紅色,在堿性條件下處于藍色離子狀態,呈藍色。組織切片經0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色,故分化之后,立即用水出去組織切片上的酸而終止分化,再用弱堿性水(0.2%氨水)使蘇木精染上的細胞核呈現藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍,但所需時間較長。山東病理HE染色分析HE染色觀察細胞形態變化。
HE染色細胞質過染分析及應對原因:(1)伊紅染色液濃度太高,特別是焰紅燃料、四溴四氯熒光素鈉的存在;(2)切片在伊紅染色時間過長;(3)切片在伊紅染色后經乙醇脫水步驟時過的太快,而使乙醇分化伊紅的作用不能產生。對策:適當稀釋伊紅染色液,減少伊紅染色時間,或者使切片在乙醇脫水等步驟時,停留時間相對均勻。同樣,也要檢查切片的厚度是否合適。切片中出現藍黑色沉淀物分析及應對原因:蘇木精染色液中的金屬膜,黏附在玻片上。對策:每天染色前仔細過濾蘇木精染色液,或建議使用半氧化蘇木精染色液,如Gill蘇木精染色液,可以避免過多的金屬膜產生。
HE染色細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著***況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當其衰老時或發生退行性變則呈現嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現透明變性時,伊紅著色由淺變深。肺部組織HE染色如何觀察。
HE染色是蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱HE染色法 ,石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。HE染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中**基本、使用*****的技術方法。由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色后,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。HE染色過程中常見的問題以及應對方法。廣東專業的HE染色檢測
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HE染色細胞漿染色原理:細胞漿內主要成分是蛋白質,為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系,當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時,大于蛋白質的等電點pH值,表現酸性電離,而帶負電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現時胞核也被染色,核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷(陽離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。安徽推薦的HE染色外包