掃描電子顯微技術(shù)的應(yīng)用能從微納米尺度分析外科植入物的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成,解析細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)以及病毒結(jié)構(gòu)形態(tài),是外科植入、病理分析等不可或缺的研究手段。 掃描電鏡結(jié)合能譜儀不*能得到樣品的結(jié)構(gòu)與形貌圖,還能在微納米尺度下進(jìn)行三維重構(gòu),并能給出相應(yīng)的化學(xué)信息以及樣品表面的元素分析。例如利用掃描電鏡觀察肺組織的立體結(jié)構(gòu)變化,特別是肺泡結(jié)構(gòu)的形態(tài)變化,是研究高致病性侵害肺臟組織的機(jī)理的新途徑。掃描電鏡下的異型*細(xì)胞顯示樹突狀,表面粗糙,且有形態(tài)各異的突起,細(xì)胞體積較大。根據(jù)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化,結(jié)合細(xì)胞的分子表達(dá)和免疫活性等生物學(xué)特性,可以為*癥防治、靶向藥物、針對手段的研究提供強(qiáng)有利的幫助。英瀚斯生物組織樣本、細(xì)胞樣本、材料掃描電鏡檢測!湖南組織掃描電鏡
掃描電鏡雖然是顯微鏡家族中的后起之秀,但由于其本身具有許多獨特的優(yōu)點,發(fā)展速度是很快的。 1 儀器分辨率較高,通過二次電子像能夠觀察試樣表面6nm左右的細(xì)節(jié),采用LaB6電子器,可以進(jìn)一步提高到3nm。 2 儀器放大倍數(shù)變化范圍大,且能連續(xù)可調(diào)。因此可以根據(jù)需要選擇大小不同的視場進(jìn)行觀察,同時在高放大倍數(shù)下也可獲得一般透射電鏡較難達(dá)到的高亮度的清晰圖像。 3 觀察樣品的景深大,視場大,圖像富有立體感,可直接觀察起伏較大的粗糙表面和試樣凹凸不平的金屬斷口象等,使人具有親臨微觀世界現(xiàn)場之感。湖南組織掃描電鏡掃描電子顯微鏡、 或掃描電鏡,是強(qiáng)大的顯微鏡用電子來形成圖像。
掃描電鏡樣本處理:新鮮取材后用2.5%戊二醛固定液固定樣本,4℃過夜放置,倒掉2.5%戊二醛固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次,每次15min;用1%的鋨酸溶液固定樣品1-2h;小心取出鋨酸廢液,用0.1M,pH7.0的磷酸緩沖液漂洗樣品三次,每次15min;用梯度濃度(包括30%,50%,70%,80%,90%和95%五種濃度)的乙醇溶液對樣品進(jìn)行脫水處理,每種濃度處理15min,再用100%的乙醇處理兩次,每次20 min。用乙醇與醋酸異戊酯的混合液(V/V=1/1)處理樣品30min,再用純醋酸異戊酯處理樣品1h或放置過夜。臨界點干燥。鍍膜,觀察。處理好的樣品在掃描電鏡中觀察。
冷凍電鏡,就是用于掃描電鏡的比較低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)(Cryo-SEM)可實現(xiàn)直接觀察液體、半液體及對電子束敏感的樣品,如生物、高分子材料等。樣品經(jīng)過比較低溫冷凍、斷裂、鍍膜制樣(噴金/噴碳)等處理后,通過冷凍傳輸系統(tǒng)放入電鏡內(nèi)的冷臺(溫度可至-185℃)即可進(jìn)行觀察。其中,快速冷凍技術(shù)可使水在低溫狀態(tài)下呈玻璃態(tài),減少冰晶的產(chǎn)生,從而不影響樣品本身結(jié)構(gòu),冷凍傳輸系統(tǒng)保證在低溫狀態(tài)下對樣品進(jìn)行電鏡觀察。假如觀察的是透過樣本的掃描電子的話,那么這種顯微鏡被稱為掃描透射電子顯微鏡(Scanning Transmission Electron Microscopy,STEM)。掃描電子顯微鏡類型多樣, 不同類型的掃描電子顯微鏡存在性能上的差異。
分辨能力是掃描電鏡SEM較為重要的性能指標(biāo),目前,鎢燈絲SEM二次電子像的分辨率為3nm~6nm,但是,這不是日常工作能實現(xiàn)的,只是驗收指標(biāo),它與觀察條件、圖象的亮度、對比度、信噪比有關(guān)。 鎢燈絲SEM在日常工作條件下,用普通試樣照相,能作到6nm分辨率就相當(dāng)不易了。在此分辨率下,可以在5萬倍以上拍出清晰照片。通常情況下,用3萬倍對普通樣品照相(如陶瓷、礦物),能給出清晰二次電子照片,就屬高水平。 當(dāng)研究某個樣品,確定它的形貌特征時,要根據(jù)工作要求、它的表面特征和實際的預(yù)觀察結(jié)果,選擇適宜的放大倍數(shù)照相,不是放大倍數(shù)越大越好。在幾萬倍放大倍數(shù)下,很多樣品表面缺乏細(xì)微形貌,難以得到清晰照片。高放大倍數(shù)時,取樣面積很小,*為試樣表面的很小一部分,缺乏代表性。掃描電子顯微鏡除了觀察表面形貌外,還能進(jìn)行成分和元素的分析,以及通過電子通道花樣進(jìn)行結(jié)晶學(xué)分析,。湖南組織掃描電鏡
掃描電鏡可動范圍大,這對觀察不規(guī)則形狀試樣的各個區(qū)域細(xì)節(jié)帶來極大的方便。湖南組織掃描電鏡
在生命科學(xué)領(lǐng)域,科學(xué)家們通常借用掃描電子顯微鏡來觀察細(xì)菌纖維素的超微結(jié)構(gòu),細(xì)菌纖維素是由微生物發(fā)酵形成的一種纖維素。使用掃描電子顯微鏡可觀測到其獨特的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。其良好的納米纖維網(wǎng)絡(luò)特征,被普遍應(yīng)用于食品、醫(yī)療及造紙工業(yè)等領(lǐng)域。腦科學(xué)也屬于生命科學(xué)領(lǐng)域,近百年來,腦科學(xué)經(jīng)過一代又一代科學(xué)家們鍥而不舍的研究,已經(jīng)發(fā)展到對單個神經(jīng)元或者神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能有較深了解。 十余年來,中國科學(xué)院自動化所在腦科學(xué)和類腦智能方面深入研究,由3臺聚束科技NavigatorSEM系列高通量(場發(fā)射)掃描電子顯微鏡組建成的電鏡機(jī)群在其實驗室進(jìn)行大規(guī)模的微觀腦圖譜數(shù)據(jù)成像工作。以1個立方毫米神經(jīng)組織塊樣本為例,如果使用傳統(tǒng)掃描電鏡進(jìn)行采集,其成像時間大概在8年以上,使用Navigator系列掃描電鏡,其成像時間約在11個月以內(nèi),而使用由三臺組成的掃描電鏡(機(jī)群)進(jìn)行成像,其成像時間約為4個月。極大的縮短了成像時間,對研究的推進(jìn)起到了良好的作用。湖南組織掃描電鏡
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