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外泌體分泌檢測

來源: 發(fā)布時間:2023年09月26日

通過改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細胞培養(yǎng)液中沉淀出來。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力,從而迫使其脫離溶液,進而在低速離心條件下發(fā)生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結(jié)合蛋白,可通過與外泌體質(zhì)膜糖蛋白上的糖鏈結(jié)合來改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚精蛋白、醋酸鈉、有機溶劑沉淀等方法進行沉淀分離。外泌體在心臟修復中起著關(guān)鍵作用。外泌體分泌檢測

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外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個關(guān)鍵的檢查點:ILV的形成,阻止MVEs的降解以及MVEs和細胞膜的融合,這三個檢查點都包含在內(nèi)體相關(guān)的囊泡運輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結(jié)構(gòu)的表面,通過招募效應因子來調(diào)節(jié)相應膜結(jié)構(gòu)的囊泡運輸,例如,在內(nèi)體溶酶體運輸網(wǎng)絡(luò)中,RAB5調(diào)節(jié)早期內(nèi)體的形成及相互融合;內(nèi)體膜上RAB5到RAB7的轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)早期向晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變;RAB7調(diào)節(jié)晚期內(nèi)體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs;RAB27調(diào)節(jié)MVEs與細胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內(nèi)吞的膜蛋白,特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體,定位到內(nèi)體和MVEs,通過MVEs和溶酶體融合來進入溶酶體降解,此過程受多種RABGTPases和ESCRT復合體的調(diào)控。外泌體分泌檢測外泌體是內(nèi)源性和質(zhì)膜起源的不同類型的膜囊泡。

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外泌體是由細胞細胞質(zhì)內(nèi)的晚期內(nèi)泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細胞外環(huán)境的一種直徑30-100nm的微型囊泡,其形態(tài)規(guī)則,呈圓形或橢圓形杯狀結(jié)構(gòu),不同類型細胞分泌的外泌體具有很多共性,包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白,如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等,表面為類似于細胞膜的脂質(zhì)雙分子層,具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質(zhì)等生物活性分子,并在細胞外環(huán)境穩(wěn)定存在,而且通過傳遞供體細胞信息,調(diào)節(jié)靶細胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細胞分泌,妊娠期母體血清中存在表達胎盤堿性磷酸酶(placentalalkalinephosphatase,)的胎盤來源外泌體,并且在妊娠中發(fā)揮重要的作用。

瘤釋放的外泌體可以通過削弱免疫效應細胞的反應和激發(fā)免疫抑制細胞的擴增,來營造一個免疫抑制的環(huán)境。瘤釋放的外泌體可以替代瘤細胞接受免疫系統(tǒng)的攻擊,從而幫助瘤細胞逃過免疫系統(tǒng)的識別。瘤釋放的外泌體可以引發(fā)炎癥,利用基質(zhì)浸潤細胞的反應營造出利于瘤生長的微環(huán)境。研究表明,在過去短短的5年里,對外泌體的研究已經(jīng)取得了比較好的的進展。如今,收集并分析瘤釋放的外泌體已經(jīng)成為液體活檢的一個重要研發(fā)方向。靶向瘤釋放外泌體的治理策略將對改善病癥患者的命運發(fā)揮出舉足輕重的影響。隨著EV研究倍受世界矚目,各國啟動了大型研究項目。

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外泌體(Exosome)開始被認為是毫無作用的“垃圾”,但隨著研究的不斷深入,人們發(fā)現(xiàn)事實并非如此,外泌體(Exosome)是具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞的微囊泡。外泌體(Exosome)介導瘤細胞的免疫耐受。瘤細胞來源的外泌體(Exosome)本身可作為瘤抗原,因此,瘤來源的外泌體(Exosome)既是一種抗原呈遞系統(tǒng),同時也是瘤排斥抗原的來源。瘤來源的外泌體(Exosome)能夠通過傳遞某些抑制信號,在機體免疫應答過程中起負性調(diào)節(jié)作用,誘導瘤細胞形成免疫耐受,從而逃避免疫細胞的殺傷。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。外泌體分泌檢測

外泌體大小不均的原因可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷,導致流體和固體的總含量不同。外泌體分泌檢測

卵巢ai患者與良性卵巢疾病患者血清外泌體中的miRNA表達譜有明顯差異,表明血清外泌體中的miRNA可以作為卵巢ai活檢的替代診斷標志物。多項研究表明外泌體中的miR-21在包括大多數(shù)ai癥的多種病理條件下過度表達。尿液外泌體來源于泌尿系統(tǒng)相關(guān)的各種細胞,包括腎小球足細胞、腎小管細胞和膀胱等,因此尿液外泌體數(shù)目、形態(tài)和生化性質(zhì)的改變往往反映泌尿系統(tǒng)疾病。通過對前列腺ai癥患者尿液中的外泌體進行轉(zhuǎn)錄組分析,鑒定到兩種已知的前列腺ai癥標志物PCA-3(prostatecanceranti[1]gen3,前列腺ai抗原3)和TMPRSS2:ERG(thefusiongeneoftransmembraneproteaseserinestoERG,跨膜蛋白酶絲氨酸與ERG的融合基因),表明尿液外泌體具有診斷和監(jiān)測ai癥患者狀態(tài)的潛力。外泌體分泌檢測

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