數字PCR(dPCR)是近年來引起重視并迅速發展起來的一種突破性的核酸定量分析技術。該技術先將核酸模板進行稀釋,分配到大量 的反應單元中,使每個反應單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應,擴增結束后對每個反應室的熒光信號進行統計學分析,來定量DNA拷貝數。數字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環閾值(Ct),也無需采用內參基因和標準曲線,準確度高、重現性好,可以實現***定量分析。由于其獨特的技術優勢,已經在臨床診斷、轉基因成分定量、單細胞基因表達分析、環境微生物檢測和下一代測序等研究領域顯示出巨大的優勢和應用前景。浚和(上海)儀器科技有限公司力于提供數字PCR ,歡迎新老客戶來電!常州MicroDrop-100數字PCR原理
MicroDrop-100微滴式數字PCR是具有國內自主知識產權的第三代JUE對定量PCR系統,整套系統由MicroDrop-100A微滴生成儀、MicroDrop-100B微滴檢測儀以及結果數據分析設備等構成。系統通過自主設計的微流控芯片,利用油水相不兼容的原理,在2分鐘時間內將PCR體系分割成100,000油包水的體系,每個體系為 的PCR反應體系,體積約為0.2nL,單次實驗一次可生成8個樣本的油包水體系。由于油包水體系的分割效應,使得數字PCR受PCRYi制物的影響相對較小,有利于復雜環境樣本的實驗操作。區別于熒光定量PCR的過程性判讀方法,數字PCR結果判讀為終點法,故其對PCR擴增效率的依賴也相對較小。常州MicroDrop-100數字PCR原理浚和(上海)儀器科技有限公司力于提供數字PCR ,有需求可以來電咨詢!
研究方向病原微生物的檢測(***、細菌等)疾病預防控制中心、出入境檢驗檢疫局系統的實驗室目前主要采用基于TaqMan探針法的定量PCR體系對病原微生物進行核酸水平的檢測,而這些目前正在使用著的檢測體系可以無縫地轉移到QX200上,從而滿足該類實驗室對于檢測結果的要求:靈敏度更高、重復性更好、無需依賴標準曲線的***定量結果,同時操作簡便。對于其他類型的研究實驗室,也可以利用ddPCR靈敏度高的特點,對各種樣品中的病原微生物展開***的研究。如HIV抗逆轉錄***治療過程中***殘留量的監控;HBV耐藥突變的檢測;HCV的分子分型;抗甲氧西林金黃色葡萄球菌的院內***監控;環境微生物不同功能基因之間的連鎖分析等等。
同時,從公式也可以看出,隨著反應陽性體系數(X)的增加,體系中目標分子的拷貝數相對于X會有較大的差距,隨著X的持續增加,數字PCR結果的不確定度也隨著提高,總體來說,數字PCR陽性體系的數量不得超過總體系數量的80%。另一個方面,N的增加會使整個數字PCR體系具有較大的線性范圍,并可以提高反應的靈敏度、穩定性以及可重復性。因此,目前dPCR都需要在成本可控的情況下,增加分配的腔室數和液滴數。商業化dPCR平臺及其特點發展到現在,市面上常見的dPCR主要有兩種:微滴式dPCR(dropletdPCR,ddPCR)和芯片式dPCR(chipdPCR,cdPCR)技術。由于芯片式dPCR制造芯片的成本較高,目前微滴式dPCR正越來越受到企業的認可。浚和(上海)儀器科技有限公司是一家專業提供數字PCR 的公司,有需求可以來電咨詢!
在定量PCR時,我們常常糾結一個問題,究竟是相對定量還是***定量呢?如今,你無需糾結了,因為數字PCR(digitalPCR)來了。盡管這兩種技術有些類似,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量,而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域:拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達)、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。浚和(上海)儀器科技有限公司是一家專業提供數字PCR 的公司。杭州JUE對定量數字PCR簡介
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研究方向無創產前篩查無創傷的產前診斷,如21號染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關遺傳疾病)。目前標本來源主要為血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準確性。而QX200檢測系統獨特的微滴化技術完全可以作為二代測序法的補充來進行的無創傷產前診斷,從而提高工作效率及節約成本。轉基 因食品或成分的檢測目前在確定轉基因作物或成分的含量時采取定量PCR的標準曲線法,這種方法需要依賴于已知濃度的標準品(CertifiedReferenceMaterialsCalibrants,CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標準物質的定標工作。常州MicroDrop-100數字PCR原理