使用方法：1、細胞培養器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應的培養器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間。2、三維膠原凝膠的制備：A、無細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。制備鼠尾膠原：重復步驟2、3，直至尾腱量夠用。合肥鼠尾膠原單價

鼠尾膠原使用方法：1、細胞培養器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應的培養器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間。三維膠原凝膠的制備：A、無細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養液，混勻后立即加到培養器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。合肥鼠尾膠原單價從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。

膠原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結構。此法處理快速，所得產品的分子量是連續的，適用于醫用生物材料及原料的制備，但產品得率低，設備腐蝕嚴重，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3%的醋酸溶液在4℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步驟:(1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱，真空冷凍干燥備用；(2)凍干鼠尾腱經低溫凍干粉碎至200?400目；(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌，防止凍結成塊，得到膠原溶脹液；(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中，鼠尾腱與蛋白酶質量比為50:I?100:1，在4°C，48?74小時酶解，期間間歇性攪拌。鼠尾膠原醋酸溶解：在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(，其生物力學強度極差，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE，結果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質量130000附近有明顯條帶，另一條帶的相對分子質量大于170000(圖2)。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察。按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。合肥鼠尾膠原單價

制備鼠尾膠原：將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡。合肥鼠尾膠原單價

一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結合的工藝，保持恒低溫無菌的環境，利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中，進行多次真空冷凍干燥，并經進一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫用材料。合肥鼠尾膠原單價

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