8000rpm離心1分鐘,上清DNA溶液轉(zhuǎn)移至新的離心管中。 2)PCR擴(kuò)增及電泳 PCR擴(kuò)增使用Identifiler Plus試劑盒,10 μl擴(kuò)增體系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃,11分鐘;94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個(gè)循環(huán);60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進(jìn)行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產(chǎn)物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實(shí)施例2 以硅膠膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的樣品管中,加入800 ul結(jié)合液,混勻;混合液轉(zhuǎn)移至裝有硅膠膜的離心柱中,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,加入500 ul漂洗液,12000rpm離心1分鐘;倒棄收集管中廢液,12000rpm離心3分鐘,將離心柱轉(zhuǎn)移至新的離心管中,70℃加熱3分鐘;加入20 ul洗脫液,70℃加熱3分鐘;12000rpm離心1分鐘,丟棄離心柱,離心管中液體即為DNA溶液。 2)買土壤DNA提取就找益啟生物。松江區(qū)土壤DNA土壤DNA提取規(guī)格
土壤中含有大量的二氧化硅成分,因此,對(duì)土壤樣品進(jìn)行DNA提取時(shí),需要考慮樣品來(lái)源的二氧化硅對(duì)DNA的結(jié)合,一旦DNA與樣品來(lái)源的二氧化硅發(fā)生結(jié)合,DNA就會(huì)隨著土壤固體顆粒物質(zhì)一起被去除。 尿液中含有一定量的DNA,可以通過(guò)多種方法提取DNA,并用于PCR檢測(cè)、STR分型檢測(cè)、二代測(cè)序分析;但是,尿液中DNA含量較低,尿液浸潤(rùn)土壤后,被土壤吸附的DNA含量更低,要針對(duì)土壤尿液進(jìn)行DNA提取,具有一定難度。 技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素: 本發(fā)明為解決上述存在的問(wèn)題,提供了一種土壤尿液DNA提取試劑盒及方法,其解決技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是: 土壤尿液DNA提取試劑盒,包括以下試劑:上海FastDNA SPIN土壤試劑盒土壤DNA提取哪家好上海土壤DNA提取的供應(yīng)商。
les using SPINeasy DNA Kit for Soil:M: 1kb plus DNA ladder、Lane 1: Organic soil、Lane 2: Paddy soil、Lane 3: Flowerbed soil、Lane 4: Saline soil 、L ane 5: Desert soil。結(jié)論:采用SPINeasy DNA Kit for Soil提取多種類型土壤基因組DNA,電泳條帶清晰,無(wú)彌散。3.提取不同類型土壤基因組DNA進(jìn)行PCR結(jié)果。Figure 2: PCR amplification of 16S rRNA gene from different soil samples using SPINeasy DNA Kit for Soil:Lane 1: Organic soil、Lane 2: Paddy soil、M: 1kb plus DN
NA基因擴(kuò)增子測(cè)序及分析,研究菌群分布。參考文獻(xiàn)2:·樣本類型:***種子。·樣本粉碎:每管20粒種子,電動(dòng)組織研磨器配合研磨杵,研磨5min。·樣本DNA提取:FastDNA Spin Kit for Soil提取。·下游實(shí)驗(yàn):細(xì)菌16S rDNA基因擴(kuò)增子測(cè)序及分析,研究菌群分布。 相關(guān)文獻(xiàn):1.Campisano A ,Antonielli L , Pancher M , et al. Bacterial Endophytic Communities in theGrapevine Depend on Pest Management【J】. Plos One, 2014, 9.2.Chen X , Krug L ,Yang H , et a上海益啟生物的聯(lián)系電話。
內(nèi)生菌共生于植物內(nèi)部,要獲得內(nèi)生菌首先需要破碎植物組織。植物組織和內(nèi)生菌在形態(tài)、硬度等性質(zhì)上均有差異,想要獲得更多內(nèi)生菌基因組DNA,對(duì)裂解介質(zhì)的選擇是難點(diǎn)。2、相對(duì)于植物基因組,雖然內(nèi)生菌包括細(xì)菌,***,放線菌等不同類型微生物,但其基因組*占微小部分單獨(dú)提取內(nèi)生菌DNA比較困難,提取到的是混合DNA,通過(guò)PCR才能鑒定。內(nèi)生菌DNA提取思路:STEP1破壞植物釋放菌體;STEP2破壞菌體釋放核酸;STEP3提取DNA。有沒(méi)有合適的土壤DNA提取是良好的科學(xué)儀器。嘉定區(qū)土壤DNA提取聯(lián)系電話
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94℃,20 秒,59℃,3分鐘,30個(gè)循環(huán);60℃,10分鐘;4℃保存;電泳在ABI 3500XL儀器中進(jìn)行;電泳上樣體系為,1 μl PCR產(chǎn)物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 實(shí)施例5 以二氧化硅包裹的磁性納米顆粒提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表層土壤,烘干,取100-200 mg土壤樣品,加入樣品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震蕩混勻后,75℃加熱裂解15分鐘;最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的樣品管中,加入800 ul結(jié)合液,混勻;混合液轉(zhuǎn)移至裝有15 ul二氧化硅包裹的磁性納米顆粒的離心管中,混勻后靜止15分鐘;上磁力架吸附2分鐘,吸棄上清液;加入500 ul漂洗液,混勻,上磁力架吸附1分鐘,吸棄上清;松江區(qū)土壤DNA土壤DNA提取規(guī)格
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