細胞培養用到的胎牛血清需要滅活嗎:細胞培養胎牛血清是不可或缺重要培養基,胎牛血清中含有諸多細胞生長因子,維生素,氨基酸等物質。我們常會看到胎牛血清的標注上有對產品滅活也有沒有滅活的,胎牛血清為什么不需...
選購胎牛血清:為了保證胎牛血清產品的均一性和穩定性,胎牛血清生產需遵循相關規定進行操作。一般來說,胎牛血清制備需經過以下幾個步驟:采集,離心,分離,無菌過濾,用來制作血清的牛血,是通過采集多頭牛的血液...
腦片膜片鉗實驗全細胞記錄:用可視化膜片鉗尋找清楚、且表面光滑、折光性較好的突觸后神經元。在加了正壓后,將記錄電極移入腦片視野中,并接近事先選好的神經元,然后,調整電極與神經元的相對位置,利用負壓形成穩...
PCR的反應條件:dNTP濃度過高會加快反應速度,但同時還可以增加堿基的錯誤摻入率。引物濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增。TaqDNA聚合酶濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增,低則合成產物量減少...
全自動膜片鉗的優勢:自動化:抓取細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作全部自動化,極大的節約實驗人員的時間精力。簡約化:傳統膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統、微電極拉制儀,防震臺、屏蔽網等全都不需要。效...
膜片鉗技術發展至今,已經成為現代細胞電生理的常規方法,它不只可以作為基礎生物醫學研究的工具,而且直接或間接為臨床醫學研究服務,目前膜片鉗技術普遍應用于神經(腦)科學、心血管科學、藥理學、細胞生物學、病...
聚合酶鏈式反應的試驗污染:PCR反應的很大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性,但令人腦袋不適的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產生。污染原因:標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器...
冷凍電鏡技術的原理:透射電鏡成像過程中,電子束穿透樣品,將樣品的三維電勢密度分布函數沿著電子束的傳播方向投影至與傳播方向垂直的二維平面上。1968年,AronKlug發現ZX截面定理,提出可以通過三維...
冷凍電子顯微鏡技術步驟之樣品制備:用于冷凍電鏡研究的生物樣品必須非常純凈。生物樣品是在高真空的條件下成像的,所以樣品的制備既要能夠保持本身的結構又能抗脫水、電子輻射?,F在普遍采用的方法是通過快速冷凍使...
引物的設計對于這個實驗至關重要,因為Real-time PCR的檢測靈敏度比較高,所以相應的對引物設計的要求就很高。普通的要求規則大家都知道,還有幾點必須注意:1,引物的錯配率(引物錯配形成引物二聚體...
聚合酶鏈式反應的試驗污染:陽性對照,在建立PCR反應實驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽性對照,它是PCR反應是否成功、產物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。陽性對照要選擇擴增度中...
膜片鉗使用的注意事項:工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經或肌細胞的膜...
冷凍電鏡技術基本原理之三維冷凍電鏡技術:樣品經過在液氮中的冷凍固定,使得生物大分子中的H2O分子以玻璃態的形式存在,保持低溫,將樣品放入顯微鏡,高度相干的電子作為光源從上面照射下來,透過樣品和附近的冰...
一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響,通常都需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如,需要檢驗某種是否對某種離子通道的影響,則需要在細胞封接后記錄電流數據,然后通過在...
胎牛血清:胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質對促進細胞生長或...
膜片鉗技術的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔...
冷凍電鏡技術原理之電子晶體學:利用電子顯微鏡對生物大分子在一維、二維以致三維空間形成的高度有序重復排列的結構(晶體)成像或者收集衍射圖樣,進而解析這些生物大分子的結構,這種方法稱為電子晶體學。其適合的...
冷凍電鏡技術總結:電子斷層成像技術則可用來研究一定厚度的亞細胞器在天然狀態下的內部結構,由于樣品厚度的限制,能看到500-1000nm左右厚度的結構,的也可以了解整個細胞不同層面的內部結構.盡管,我們...
冷凍電鏡技術工作流程:做好前面的工作就需要設定較佳的參數(比如:欠焦值、放大倍數和電子劑量等),記錄這些樣品區域的大量圖像,用手工或半自動程序框取那些離散的分子形成的投影圖。然后就是三維結構搭建。由于...
胎牛血清制備:離心,將準備好的瓶放入離心套筒調好平衡后,對稱放入離心機,按1800轉/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經...
如何挑選好的胎牛血清:好的胎牛血清是實驗的成功的前提是所有實驗人做細胞培養的共識,如何挑選好的胎牛血清,可以從以下幾個方面著手。1.外觀,好的血清應是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘...
冷凍電子顯微技術主要包括單顆粒冷凍電鏡技術和冷凍電子斷層掃描技術。單顆粒冷凍電鏡技術首先捕獲大量隨機分布的同一種生物樣品的二維圖像,然后通過圖像處理算法解析其三維結構。近年來,隨著冷凍電鏡設備和計算機...
膜片鉗使用操作流程及注意事項:1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作(值日生按照實驗室統一所發值日生要求履職)。3...
膜片鉗電生理記錄技術:膜片鉗技術的基本原理:膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數量級,因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。然后對...
冷凍電鏡是什么?冷凍電鏡技術的應用:冷凍電鏡主要用于掃描電鏡的很低溫冷凍制樣和傳輸技術,英文名Cryo-SEM,利用冷凍電鏡技術可實現直接觀察液體和半液體及對電子束敏感的樣品,如生物、高分子材料等。尤...
Real-time PCR式反應準備:10×擴增緩沖液、4種dNTP混合物(終濃度)、引物(終濃度)、模板DNA、TaqDNA聚合酶、Mg2+(終濃度)、補加雙蒸水等。其中dNTP、引物、模板DNA、...
聚合酶鏈式反應:因為PCR擴增了目的DNA區域,所以PCR可以用于分析極少量的樣品。這對于法醫檢定法,當時只有微量的DNA可作為證據。聚合酶鏈反應也可用于分析古代DNA那已經有數萬年的歷史了。這些基于...
胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實驗證明,經過正確處理的熱滅活胎牛血清,對于大多數的細胞而言都是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至可能因為高溫處理影響了血清的質量...
冷凍電鏡技術中的電子斷層掃描技術與單顆粒分析法的比較:單顆粒分析法:它的優點:解析生物大分子的理論分辨率可達原子級;樣品受總輻射值小;對稱顆粒的解析分辨率更高;分子量越大,結果越好;電子斷層掃描技術:...
為了便于對所檢測樣本進行比較,在real-timeQ-PCR反應的指數期,首先需設定一定熒光信號的域值,一般這個域值(threshold)是以PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號(bas...